食品微生物检验技能试题一
一、有两管菌种，一管为金黄葡萄球菌，一管为大肠杆菌，但标签已脱落，请通过染色实验将其分开。（40分） 1、 涂片、干燥、固定（10分） 2、 染色（15分） 3、 镜检（10分） 4、 报告（5分）
二、酱油中细菌总数的测定（60分） 1、 实验准备（20分） 2、 样品稀释与培养（20分） 3、 菌落计数方法（10分） 4、 菌落计数的报告（10分 答案要点 一、菌种区分 1、涂片、干燥、固定
（1）取两块洁净载玻片，分别在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作分别挑取菌种于载玻片的水滴中，调匀涂成薄膜，直径1.5cm左右。 （2）干燥 室温干燥或用电吹风吹干。
（3）固定 涂片面上，在酒精灯上过火三次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则，形态会破坏。 2、染色
（1）初染 加草酸铵结晶紫染色液染色1分钟，用水冲洗。 （2）媒染 滴加碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，水洗。
（3）脱色 将载玻片上的水甩干净，在载玻片下衬以白色背景，滴加95%的酒精脱色，直洗至流出的酒精刚刚不出现紫色为止（0.5分钟），立即用水冲净酒精。
（4）复染 用番红染液染1-2分钟，水洗。 3、镜检 干燥后，置显微镜下观察。
4、报告 球状、染成紫色者为金黄葡萄球菌，杆状、染成红色者为大肠杆菌。
二、酱油中细菌总数的测定 1、实验准备 （1）酱油
（2）1ml与10ml吸管将吸管洗净烘干，塞入少量脱脂棉，卷好防潮纸进行干热灭菌（160℃、2小时）或加压灭菌。（121℃、30分钟）
（3）平皿 将平皿分为10个一卷，用防潮纸包好，同上述吸管一起进行灭菌。 （4）备一瓶90ml和三管9ml的生理盐水，配以松紧适度的棉塞，用防潮纸将口部包好，同上述材料一起进行加压蒸汽灭菌，但需使灭菌后仍能保持原有毫升数（也可应用生理盐水灭菌后直接吸取的办法）。
（5）培养基 蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂培养基。将培养基用碱液调至PH7.2-7.4,装入灭菌的试管中约15ml,进行加压灭菌后，保温45℃备用。 2、样品稀释与培养
（1）用10ml无菌吸管将酱油样品注入90ml无菌生理盐水内，充分摇匀，作成1：10的稀释液。应严格无菌操作。
（2）用1ml无菌吸管，吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的试管内，振荡试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
（3）另取1ml无菌吸管，按上项操作顺序做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，即换用一支灭菌吸管，配成1：1000和1：10000的稀释液。
（4）再取三支1ml无菌吸管（或使用该稀释度的吸管），分别吸取1：10、1：100和1：1000的稀释液各1ml于平皿内，每个稀释度做两个平皿。 （5）立即将15ml已冷却至45℃的培养基注入平皿内，并转动平皿，使其混合均匀。
（6）待琼脂凝固后，用纸包好，反转平皿，置于37℃恒温箱内培养24小时后取出，计算平皿内细菌菌落数目，成以稀释倍数，即得每毫升样品所含菌落总数。 4、菌落计数方法
（1）从温箱中取出平皿，用蜡笔将皿底分为若干等分区域（若菌落稀少，也可不分）
（2）以左手拇指、无名指、小指持握平皿，斜置自然光下，皿底以食指、中指衬托显出昏暗背景以利菌落观察，右手持蜡笔式钢笔计点菌落数，每数一区，于边上标记计数，再用放大镜检查，有无遗漏。合计各区菌落数即为一皿的菌落总
数。如平皿菌落很多不易读数时，亦可选择代表区读计菌落数，然后再求出全皿菌落数。
5、菌落计数的报告
（1）平皿菌落的选择 选取菌落数在30-300之间的平皿作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平皿应采用两个平皿平均数，其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布很均匀，则可于计数半皿后乘以2代表全皿菌落数。 （2）稀释度的选择
①规定选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，以平皿菌落数乘以稀释倍数，所得菌落总数作为报告。
②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间，则应视二者（高稀释度菌落数与低稀释度菌落数）之比大小来决定。若其比值小于2，应报告平均数；若大于2，则报告其中较小数字。
③若所有稀释度其平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
④若所有稀释度其平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
⑤若所有稀释度其平均菌落数不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最小接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
（3）菌落数的报告 菌落数在100以内时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。
食品微生物检验技能试题二
一、肉膏蛋白胨培养基的配制（60分） 1、称量、加热溶解（20分）
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