008生命科学学院两种云南特有蝎子Cytb基因遗传多样性比较研究

附件1：

云南省大学生创新创业训练计划项目

立项申请表

推 荐 学 校： 云南大学 项 目 名 称： 两种云南特有蝎子Cyt b基因遗传 多样性比较研究

项目 申报 类别： 创新训练项目 所属一级学科名称： 生物学 申 请 人： 郑雨田 所在学院及年级： 生命科学学院，2012级 指 导 教 师： 肖 蘅 单位和职称： 云南大学生命科学学院，教授 填 表 日 期： 2013年5月8日

云南省教育厅制 2013年2月

填 表 说 明

1.《申报书》各项内容，必须实事求是，表达要明确严谨，并要求打印或用钢笔填写。页面不够时可加页，不得破坏后面表格的完整和美观。对于填写不合要求、内容含糊不清、字迹潦草者，不予受理。 2. 该《申报书》为A4 纸，各单位或个人可以从云南省教育厅高等教育处网站自行下载或翻印，但格式、内容、大小应与原件相同。

一、项目申请人情况

姓 名 郑雨田 性别 女 民族 汉 出生日期 申 所在学院 生命科学学院 专业、班级 生物学基地班 请 项目名称 两种云南特有蝎子Cyt b基因遗传多样性比较研究人 通讯地址 项目类别 项目周期 云南大学呈贡校区楸苑二幢A517室 电话 ■ 创新训练 □ 创业训练 □ 创业实践 1年半 所属学科专业 动物学 申请人参加科研的经历 自何年月 至何年月 参加的项目 担任的工作 项目组其他成员（不超过5人，不包括申请人和指导教师） 姓 名 性别年级 所在学院 专 业 分 工 签 名 孔德伦 沈 灵 苏 新 张 萌 胡 丹 男 女 男 女 女 2012 2012 2011 2011 2011 生命科学学院 生命科学学院 生命科学学院 生命科学学院 生命科学学院 生物学基地班 生物学基地班 生物学基地班 DNA提取 引物设计 PCR扩增 孔德伦 沈 灵 苏 新 张 萌 胡 丹 生命科学与技术 PCR测序 基地班 生物技术 数据分析 二、拟申报项目情况

（一）项目介绍 （研究目标、研究背景及现状、工作原理和方案设想、计划进度安排等） 研究目标： 通过比较两种云南特有的蝎子（壮真蝎 Euscorpiops validus和普洱真蝎Euscorpiops puerensis）的线粒体DNA细胞色素b基因的序列差异，研究两种蝎子的遗传多样性，探索这两种蝎子的遗传差异，为保护和合理利用蝎子资源提供科学依据。 研究背景及现状： 蝎目(Scorpiones)，属于节肢动物门、螯肢亚门、蛛形纲，是蛛形纲比较原始的类群。蝎目动物分布于世界各地，但以温带和热带为主，北纬50度以北少见。温带种类有冬眠习性，一般在谷雨前后(4月中、下旬)出蛰，立冬前后(11月上旬)入蛰，全年活动约6个月。蝎目动物性喜干燥，多生活在山坡石砾间、近地面的洞穴中以及墙隙内，昼伏夜出，捕食昆虫等。繁殖多在6、7月间。 蝎目种类繁多，2000年Fet 等人，在《世界蝎子名录》一书中总结了前人的分类工作，认为蝎种类为16科155属1259种(Fet et a1．，2000)。截止到2010年，中国蝎目已知种类达5科12属51种和亚种。云南蝎目已知种类达2科3属9种。 我国目前最常见的东亚钳蝎(也称马氏正钳蝎)，是一种重要的中药，称“全蝎”，有搜风、止痛和镇惊等作用，主治中风、半身不遂、口眼歪斜、破伤风、淋巴结结核、疮疡肿毒等症。 研究动物的遗传多样性对于积极保护和合理利用动物资源至关重要。但蝎目已有的研究主要集中在分类、区系和系统学方面，对于蝎目动物的遗传多样性研究基本上是空白。因此，开展蝎目动物的遗传多样性研究十分必要和重要。 工作原理和方案设想： 遗传多样性（genetic diversity）在广义上是指种内或种间表现在分子、细胞、个体三个水平的遗传变异度，狭义上是指种内基因的变化，包括种内显著不同的种群间和同一种群内的遗传变异，也称为基因多样性。在物种内部，因生境的不同也会产生遗传上的多样化，这些种内遗传变异的来源主要有突变、重组和染色体畸变，其中最根本的是突变，它是所有生物多样性产生的根源。各种生物不同亚种或地方品种中都存在着丰富的遗传多样性，它们是物种以上各水平多样性的最重要的来源。遗传多样性不仅包括遗传变异高低，也包括遗传变异分布格局，即种群的遗传结构。 研究遗传多样性可用不同的遗传标记和方法。包括形态水平标记、细胞水平标记、蛋白质水平标记和分子水平标记。随着分子生物学的发展，遗传标记的概念发展为在核酸分子水平上具有相对差异的等位基因。因它们广泛地存在于高等生物DNA的编码区和非编码区，故称之为DNA分子标记。DNA分子标记是基于研究DNA分子由于缺失、插入、易位、倒位、重排或由于存在长短与排列不一的重复序列等机制而产生的多态性，是 DNA水平上遗传变异的直接反映。 与其他遗传标记相比，分子标记具有以下优越性:1）直接以DNA的形式表现，不受实验材料、时间、环境等等因素的影响;2）可以遍及整个基因组以及核外基因；3) 多态性高，自然界存在着许多等位变异，不需专门创造特殊的遗传材料; 4)表现为“中性”，即不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的连锁;5) 能够鉴别出纯合基因型与杂合基因型，提供完整的遗传信息。 国内外常用的分子标记技术主要包括：限制性片段长度多态、随机扩增多态性DNA标记、扩增片段长度多态性、DNA指纹标记、单链构象多态性、现在主要使用的是以DNA测序技术为核心 的分子标记技术。 线粒体DNA具有下列几个特点:分子量小、分子结构简单;母系遗传;几乎不发生重组;进化速度快;不同的区域进化速度存在差异，允许选择不同的区域进行不同时间尺度的进化分析。由于线粒体DNA具有上述特点，使其成为分子群体遗传学和分子系统学研究中一种重要的分子标记。 本研究拟对两种仅分布于云南省的蝎子（壮真蝎 Euscorpiops validus和普洱真蝎Euscorpiops puerensis）提取线粒体DNA，设计引物，PCR扩增细胞色素b基因，测序，比较分析其遗传多样性。 工作方案和技术环节主要包括： 标本的采集、保存与鉴定。此环节指导教师课题组已经完成。 总DNA的提取。采用标准酚/氯仿法从无水乙醇溶液保存的蝎子样品中提取总DNA。 PCR扩增。PCR扩增引物设计、PCR扩增条件设定、PCR产物回收。 DNA序列测定。测序反应、纯化测序反应产物、测序仪测序。 序列编辑、排序及单倍型统计。 序列数据分析与遗传多样性分析。 计划进度安排： 参考文献查阅。DNA提取； 引物设计，PCR扩增； DNA测序； DNA序列分析，遗传多样性比较研究； 论文撰写； 课题总结。