利用PCR技术扩增目的基因表述题 利用PCR技术扩增目的基因表述题
1、PCR技术由谁发明的? 穆里斯
2、PCR是一种什么技术? 是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 3、PCR技术的目的是什么? 通过指数式扩增获取大量的目的基因 4、PCR技术的原理是什么?扩增的基因形态如何? DNA双链复制 两种形态:一是从生物体的DNA上剪切下来,一是逆转录得到的基因
5、PCR扩增目的基因的前提是什么?为什么?
要有一段已知目的基因的核苷酸序列 目的是根据这一序列合成引物 6、PCR技术为什么要有引物?引物的作用是什么?
DNA聚合酶只能从5端向3端延伸DNA链,且只能将单个脱氧核苷酸连接到已知的DNA片段上 作用:结合在模板DNA上,提供DNA延伸起始位点 7、体内DNA复制和PCR技术的引物有什么不同? 体内的引物是RNA,完成复制后要切除。
PCR技术的引物是DNA,完成复制后不用切除。
(体外不用RNA的原因是体外温度变化比较大,用RNA会变性)
8、PCR技术为什么要用两种不同的引物?且两种引物不能存在互补配对的序列,原因是什么? 用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增
避免引物自连,从而导致引物不能同模板DNA结合,最终使链式反应不能进一步进行 9、写出PCR扩增的过程? ①变性(DNA双链解开):
模板DNA加热至90-95℃,使H键断开,DNA成为单链后与引物结合 ②退火(也称复性,引物与DNA单链结合):
温度降至55~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合; ③延伸(新DNA单链延伸):
DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于70-75℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链. 10、体内DNA复制和PCR技术的异同有哪些?
1)温度不同:体内温度一般恒定, PCR的温度高且有变化
2)酶不同:体内要DNA解旋酶、DNA聚合酶, PCR需要Taq酶(中文名称最好记下来) 3)引物不同:体内为RNA(身身合成), PCR为DNA,且要两种不同的引物。 4)解旋方法不同:体内用解旋酶, PCR用温度使H键断裂 5)引物是否要去除:体内要,PCR不用 相同点:模板,原料,方向及配对原则相同 ---------------
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1、PCR技术中所用的DNA聚合酶与生物体内的DNA聚合酶有什么区别? PCR技术中所用的DNA聚合酶可以耐高温
2、在DNA聚合酶的作用下,两条子链的延伸方向是什么? 从子链的5端向3端延伸
3、PCR技术中的变性和延伸的实质分别是什么? 变性:DNA双链解旋
延伸:以DNA单链为模板,按碱基互补配对原则合成子链的过程
4、PCR与人体内DNA复制相比有何特殊之处?(一般记住两点即可) PCR技术是离体条件,需要高温,酶要耐高温,引物不需切除
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利用PCR技术扩增目的基因表述题
5、PCR技术需要的条件有:
DNA模板,原料(四种脱氧核苷酸dATP,dTTP,dCTP,dGTP),Taq酶,两种引物 另外还需要:液体环境,适宜的温度,一定的酸碱度(缓冲液含Mg2+) 6、PCR开始时加热到94℃的目的是什么? 使DNA片段的氢键断裂
7、若要检测一个人是否感染了艾滋病毒病毒,你认为是否可以用到PCR技术?
可以,若感染了艾滋病毒,则血液中有HIV病毒,可以用PCR技术来扩增艾滋病毒的RNA 8、引物判断
9、引物的化学本质是什么? 一小段单链DNA或者RNA
10、PCR技术是否需要加入ATP?
不需要额外单独加入ATP,因为dNTP水解后会产生 11、PCR复制的结果情况
(第一次复制)
① ② ③ ④
① (第二次复制)
⑤ ⑥
②
注意:1)①复制后得到③④,②复制后得到⑤⑥ 2)只有④的35和⑤的53这两段才是目的基因的片段 3)第二次复制后得到的四个片段都还不是基因X
(第三次复制)
③复制得到A(二个)
⑤复制得到B(二个)
④复制得到C(二个) ⑥复制得到D(二个)
注:1)复制三次后,只有C上和B下才是目的基因X,所以三次复制后只得到2个目的基因 2)如果进行第四次复制:(可以得到8个目的基因)
A下可得一个目的基因, B上得一个,B下得二个 C上得二个,C下得一个 D上得一个
3)从第三交复制结果可以看出,不是目的基因X的单链片段是8段(A上两条,A下一条,B上一条,C下一条,D
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利用PCR技术扩增目的基因表述题
上一条,D下二条)所以不管接下来复制多少次,都有8段单链不可能形成目的基因。
所以复制次数和目的基因X的关系式是: 目的基因的个数=2n-2n
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利用PCR技术扩增目的基因表述题
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