致羔羊腹泻大肠杆菌分离培养、药敏试验及鉴定
作者：吴桐忠等
来源：《当代畜禽养殖业》 2017年第2期
摘要：为了确定引起该羊场羔羊腹泻的致病菌，通过分离培养和细菌鉴定确定致病菌为大肠杆菌，药敏试验结果表明米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮对该菌的抑制和杀灭效果最好。
关键字：羔羊;大肠杆菌;分离培养;药敏实验
2016年9月，新疆沙湾县某羊场发生以羔羊腹泻为主要症状的急性传染性疾病。对发病死亡1小时内的羊采样2只，共采10个样（肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴各2份）送研究室。通过分离培养、药敏试验和细菌鉴定等实验，确定为大肠杆菌感染。
1 材料与方法
（1）实验材料。细菌分离培养工具一套、vitek2 compact全自动微生化鉴定系统（法国梅里埃公司制造）；病死羊肺、肝、脾、肺淋巴和肠淋巴采样各2份；普通营养琼脂培养基购自生工生物工程（上海）股份有限公司，液体培养基和血琼脂平板培养基为实验室自制，革兰氏染色液购自珠海贝索生物技术有限公司，药敏片为杭州滨和微生物试剂有限公司2016年8月20日生产的35瓶装常用新药敏纸片。
（2）实验方法。无菌条件下采样分别培养于装有液体琼脂培养基的试管里，接种于绵阳血液平板上，做好记录，最后把试管和血平板放入37℃培养箱培养18小时；无菌条件下选择实验中有明显变化的试管（肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1），使用移液管抽取60uL分散滴入血琼脂平板上，用消毒棉签涂满平板表面，待平面稍干，用镊子取出药敏片对应编号贴在平板表面相应位置。重复以上操作，最后把平板放入37℃培养箱中培养18小时；细菌鉴定使用仪器为vitek2 compact全自动微生物鉴定系统。无菌操作下挑取试验中（肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1）血平板上培养的菌落移入比色管（先做好登记）中，用移液枪混匀后比色，调节比色度在0.5~0.63之间，插入革兰氏阴性菌鉴定卡（通过涂片观察检测为革兰氏阴性杆菌），然后按照细菌鉴定仪的操作进行操作。
2 检测结果分析
（1）细菌分离培养结果。液体培养基培养肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1，整体浑浊，振荡可见云雾状沉淀浮起，静置后沉到试管底部，其他几组不明显。血平板培养肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1，可见圆形凸起、湿润、光滑和半透明的乳白色菌落，β溶血，涂片观察，发现革兰氏阴性无芽孢直杆菌。
（2）药敏试验。通过对肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1、淋巴1药敏实验，结果显示4种病料血平板对米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮敏感，对头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、环丙沙星和诺氟沙星中敏，对苯唑西林、青霉素g、红霉素、大观霉素、克拉霉素、万古霉素、克林霉素、氯霉素、四环素、诺氟沙星、环丙沙星、左氧沙星、多粘菌素、复方新诺明、氨苯西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛、氧氟沙星、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、哌拉西林、庆大霉素、阿米卡星和麦迪霉素耐药。
（3）细菌鉴定。通过vitek2 compact全自动微生物鉴定系统对肝脏2、肺淋巴1、肠淋巴1和淋巴1血平板培养菌鉴定，均为大肠杆菌。
3 讨论
经过细菌分离培养、染色镜检和细菌鉴定，判断致病菌为大肠杆菌。对该大肠杆菌进行药敏试验发现，该菌对大部分药物有耐药性，对米诺环素、氨曲南等药物敏感，对头孢唑啉等药物中敏，对苯唑西林、青霉素g等药物耐药。从以上结果可以看出，该菌对大部分药物有耐药性，可能是因为老羊场导致。针对该病禁止滥用药物，用药前应筛选敏感药物。选用较敏感药物治疗或者联合用药，尽量减少耐药性的产生，最好用本羊场分离的大肠杆菌制作的灭活疫苗免疫。平时要注意定期消毒，保持羊场清洁卫生。
基金项目：新农垦科学院引导计划（72yyd201409）
兵团科技攻关计划项目（2016AC018）
参考文献：
[1]王军明,王龙华,王静等.猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定及耐药特性分析(J).上海畜牧兽医通讯,2015,(6):46,50.
[2]张强张录娟.安丘市鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验(J).中国畜牧兽医文摘,2015,31(6):(54,61）.
[3]杨建珍，朱红英.鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验(J).江西畜牧兽医杂志,2015(5):29-31.
[4]李琳,寸诚芬,李正甫等.江川县鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析(J).云南畜牧兽医,2015(4):24-26.
[5]杨培奎,张振霞,沈浩铎等.狮头鹅大肠杆菌分离鉴定、药敏试验及灭活疫苗的制备(J).湖北农业科学2015,54（11):2679-2682.
[6]王军明,王龙华,王静等.仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定及耐药特性分析(J).上海畜牧兽医通讯,2015(6):46,50.
[7]马长宾,陈文武,王忠山等.致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验(J).中国动物检疫2015,32(3):78-82.
[8]普绍林,石於友,李美荃等.致犊牛腹泻大肠杆菌云南株的分离鉴定及药敏试验(J).云南畜牧兽医,2015,(3):1-4.
[9]马增军,芮萍,逯春香等.猪源肠外致病性大肠杆菌的分离与鉴定(J).中国人兽共患病学报,2015,31(2):130-134.
致羔羊腹泻大肠杆菌分离培养、药敏试验及鉴定
