免疫组化常用标记物
一、常用标志物
１、 CD１5（LｅuM１）－--（阳性部位:细胞膜）。就是一种由半乳糖、岩藻糖与N—乙酰葡萄糖组成得碳水化合物抗原，又称半抗原χ,就是粒/单核细胞相关抗原。免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活得淋巴细胞（主要就是Ｔ淋巴细胞)、R-S细胞、大多数腺癌等。
2、 癌胚抗原（carcinｏembｒyonic ａｎtｉgen,ＣEA)(CD66e）—-—(阳性部位：细胞膜/浆).癌胚抗原就是表达于胎儿上皮细胞得一种糖蛋白,分子量为180kDａ.存于某些恶性肿瘤组织尤其就是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺)与肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞与良性肿瘤亦可表达。CEA主要用于标记上皮性肿瘤，尤其就是腺上皮来源得腺癌。
3、嗜铬素A（cｈromogrａnin Ａ,CｇA）--—(阳性部位:细胞浆）。嗜铬素就是位于神经分泌颗粒内得酸性糖蛋白家族，就是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76~12０ kDa,分布广泛。含量最丰富得就是嗜铬素A，另两个就是嗜铬素B与嗜铬素C.几乎所有得神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞得分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒得内分泌细胞与神经内分泌细胞来源得肿瘤细胞。此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端得片段，而不与氨基末端得片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源得肿瘤。对小细胞癌进行抗原修复可提高检测得敏感性。
４、细胞角蛋白(ｃytokｅrａｔiｎ paｎ,广谱 CK）－—－ AE1／ ＡE３（阳性部位:细胞浆)。此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白(Ⅰ型/低分子量)与碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）.用于标记上皮及上皮来源得肿瘤,特别就是对鉴别与判断转移性肿瘤就是否为上皮源性具有一定得意义.
5、细胞角蛋白5/6(cytokeｒatin 5／６,CK5／6）－--（阳性部位：细胞浆）。在正常组织中,鳞状上皮与导管上皮得基底细胞以及部分得鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞与间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。因此,可用于鳞癌与腺癌、间皮瘤与腺癌得鉴别诊断。支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。
6、 细胞角蛋白7（cytoｋeratin 7,CK7)－-—（阳性部位:细胞浆).CK7就是分子量为5４ kDa得一种碱性细胞角蛋白,存在于大多数正常组织得腺上皮与移行上皮细胞中，一般非上皮来源得细胞无表达。在卵巢、乳腺与肺得腺癌呈阳性反应，而胃肠道得腺癌阴性。
7、 细胞角蛋白20(cytoｋerａｔｉn 20,CＫ20）——－（阳性部位：细胞浆）。CＫ２０（4６ｋDa)存在于正常得胃肠道上皮、移行上皮、Merkel细胞及其来源得肿瘤，而乳腺癌、肺癌与神经内分泌肿瘤不表达。 CK7 pｏsitive CＫ7 negａtive CK2０ positｉｖｅ unｉｎｆorｍaｔｉｖｅ cｏｌｏｒectum ＣK20 negative ｌung uninformａtive
8、 细胞角蛋白（高分子量）(cytｏｋeｒaｔin,ＨMＷ）－--（阳性部位：细胞浆）.高分子量细胞角蛋白抗体（34βＥ12）可以识别68ｋDa、58ｋDａ、５6、5ｋＤａ与50ｋＤa得细胞角蛋白.
9、上皮膜抗原（eｐiｔhelｉal ｍembrane aｎｔｉｇｅn，EMA）(MUC１）-——（阳性部位:细胞浆）。上皮膜抗原就是一种高分子量(４00 kDa）跨膜糖蛋白，广泛分布于各种上皮细胞及其来源得肿瘤.癌细胞过表达MUC1与肿瘤侵袭有关，有意义得免疫反应性为膜阳性,如为纯粹得胞浆着色则为假阳性.此抗体可以用于标记上皮及上皮源性肿瘤，ＥMA阳性表达得肿瘤包括大多数得癌、间皮瘤、滑膜肉瘤与上皮样肉瘤等，淋巴瘤、黑色素瘤与软组织肿瘤阴性表达.
1０、ＨBME1-—-（阳性部位:细胞膜）.该抗体与间皮细胞表面得抗原反应,染色方式呈现一种特殊得“厚膜”方式，在鉴别间皮瘤与腺癌时有一定得参考价值:间皮瘤为厚膜型，腺癌为薄膜型或胞浆着色。 １1、突触素(sｙnaptｏphysｉｎ,Syn）—-—（阳性部位:细胞浆)。突触素就是分子量为３8kDa得糖蛋白，主要存在于神经元突触前囊泡膜,就是神经性与上皮性神经内分泌肿瘤得特异性标志之一，用于标记神经内分泌肿瘤。
１2、甲状腺转录因子1（tｈｙｒoiｄ ｔraｎscripｔiｏn facｔｏｒ—1，TTF—1）-——(阳性部位：细胞核)。TTＦ—1表达于甲状腺腺上皮与肺得上皮细胞中.大多数肺得小细胞癌、腺癌、少部分大细胞癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TＴF-１阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTＦ-1阴性。
13、波形蛋白（Vimenｔin,Vｉm）-－-(阳性部位：细胞浆）。波形蛋白分子量为57 kD,就是原始得中间丝，分布极广，所有间（充）质细胞均有表达，此抗体得免疫原为猪得晶体，但可与人、大鼠与鸡得波形蛋白反应。波形蛋白就是正常间叶细胞及其来源得肿瘤得特异性标志,在许多上皮细胞及其肿瘤中可与细胞角蛋白共表达。诊断用途：就是一个有用得“对照标记”，即:如果波形蛋白未能较易地在非肿瘤性内皮细胞、纤维母细胞与其她间叶成分中检测到,则总得说来组织得免疫反应性未能得到适当得保存。在间皮瘤与腺癌得鉴别诊断中，波形蛋白在间皮瘤得上皮细胞中更常见与细胞角蛋白共表达。
１4、Cam ５、2－－—分子量4５ ｋD与52 ｋＤ得人角蛋白抗原决定簇。与正常分泌上皮而不就是复层鳞状上皮反应。
15、ＭNF-1１6—－－该抗体识别许多细胞角蛋白共同得抗原决定簇，就是上皮性肿瘤得一线标记。免疫组织化学表达：正常组织有复层鳞状上皮与单纯腺上皮、平滑肌、淋巴结树突状细胞、浆细胞等;肿瘤主要有鳞癌、小细胞癌、肉瘤样癌/梭形细胞癌、腺癌、间皮瘤(纤维状细胞）、滑膜肉瘤、血管肿瘤、平滑肌肿瘤与浆细胞瘤等。
16、Dｅsｍin－—－结蛋白分子量为5３ kＤ得中间丝（骨骼蛋白），有三种单克隆抗体（D33, DER-11与DEB—5）,与其她中间丝无交叉反应.在平滑肌与横纹肌可检测到结蛋白，在肌纤维母细胞中亦有少量结蛋白.在平滑肌组织中结蛋白含量要多于血管平滑肌。诊断用途:识别平滑肌与横纹肌肿瘤。
17、 ＭＯC－３1-－—为识别上皮细胞中一种功能未知得３８ ｋＤa 糖蛋白得单克隆抗体.大多数腺癌为阳性，而间皮瘤通常为阴性。
18、表面活性蛋白(Sｕrfａctant proteins,ＳＰ)。肺表面活性物质含有许多蛋白,包括１0 kD得Cｌara细胞蛋白与表面活性蛋白A、B、C、Ｄ 。作为细支气管肺泡癌得标志。 19、α1—AT——-细支气管肺泡癌Cｌaｒa细胞型呈阳性表达. 二、恶性上皮性肿瘤
１、鳞癌－-—发生于支气管上皮，有角化与／或细胞间桥得恶性上皮性肿瘤。有四个亚型：①乳头状；②透明细胞型;③小细胞型；④基底细胞样绝大多数表达高分子角蛋白（34βE12),CＫ5/６与CＥＡ，许多鳞癌表达低分子角蛋白(３5βH１1），较少表达TTF－1或ＣK7。
2、小细胞癌-——由圆形、椭圆形或梭形小细胞组成得恶性上皮性肿瘤.胞质很少,边界不清；核内可见细颗粒状染色质,核仁不明显或缺如；细胞核变形很明显；常有大量坏死与许多核分裂。绝大多数小细胞癌CD５6、Cg、SY阳性,神经内分泌标志表达率≥90%;小细胞癌常见ＴＴF—1与CK阳性.鉴别诊断： ① 淋巴瘤－—-小细胞癌显示为神经内分泌标志、TTＦ—１与ＣＫ阳性,LCA阴性. ② PNEＴ--—小细胞癌与PNＥＴ均可表达MIC—2（ＣD９９），但小细胞癌TTF—1与CK阳性,而ＰNEＴ则为阴性。 ③ Ｍｅrkｅl细胞瘤-－—本瘤CK2０阳性，CK７、TTＦ-1阴性可与小细胞癌鉴别。
3、腺癌－--具有腺样分化与产生黏液得恶性上皮性肿瘤.呈腺泡样、乳头状、细支气管肺泡细胞样或实性伴有黏液得生长方式,可混合存在。有下列亚型：① 腺癌,混合亚型； ② 腺泡样腺癌; ③ 乳头状腺癌; ④ 细支气管肺泡细胞癌 包括非粘液型、粘液型、混合性非粘液性与粘液性或中间型。非粘液型细支气管肺泡癌又包括Ⅱ型肺泡细胞型与Cｌara细胞型,前者ＳP、TＴF－1等阳性,后者Ｃlａｒa蛋白及α1-ＡT阳性，有助于与其它腺癌鉴别诊断. ⑤实性腺癌伴有粘液产生 ⑥胎儿型腺癌 ⑦黏液性(“胶样”）腺癌 ⑧黏液性囊腺癌 ⑨印戒细胞腺癌 ⑩透明细胞腺癌 腺癌得免疫组化特征与其亚型与分化程度有关，典型得上皮性标志为：AE1/AE3,CAM5、2,ＥＭＡ与CＥA.ＣＫ7阳性高于ＣK20，TTF—1阳性率较高,尤其就是在分化好得腺癌（在TTＦ—１阳性病例中，甲状腺球蛋白阴性有助于排除甲状腺癌）.表面活性蛋白(Ｓｕrfactant aｐｏｐrotein,ＳP）较TTF－1为低，但要注意得就是转移性肿瘤细胞也可能吸附一些SP。在黏液性肿瘤中，尤其就是黏液型BAC可能有例外，即ＴＴF－1阴性,而CＫ7与CＫ2０往往阳性。
鉴别诊断： ① 转移性腺癌－－—有原发灶病史，在肺内常为多个病灶。如为单个病灶,则鉴别较为困难。肺腺癌有组织学亚型得异质性，尤其就是存在ＢＡＣ成分时可明确诊断;6０％表达表面活性蛋白(SP—Ａ,prｏ-SP—Ｂ,pro－SＰ-C)，７０％表达TTＦ-1;CK7（+)/CＫ20（－）,仅黏液性BAC为ＴTＦ-１（－）／ CＫ２0（＋）。转移性腺癌多为均质性，TＴF—1阴性（除外甲状腺癌:黏液染色阴性，甲状腺球蛋白
阳性)。肾细胞癌：ＡE1/AE3、CK7弱阳性，Ｖiｍ强阳性。结肠腺癌:CK7（－）/CＫ20（+)，CDX—2阳性.乳腺癌:ER（＋）。卵巢癌:雌二醇受体、CA1２５、Vim、钙粘蛋白、抑制素(＋)；CEA（－)。前列腺癌:PSA（＋）. ② 上皮型恶性间皮瘤-——根据临床、巨检、镜检、免疫组化与电镜特点进行鉴别.免疫组化方面主要包括腺癌特异标志TTF－1、普通标志ＣEA、ＣD15或MＯC31;间皮瘤标志calｒetiｎin（钙视网膜蛋白)与CK5/6。 ③ 不典型腺瘤样增生－—－发生于肺周边部得局灶性病变，通常＜５mm,表现为衬覆肺泡或呼吸性细支气管得不典型细胞呈轻—中度局限性增生,无间质炎症与纤维化。不典型腺瘤样增生表达SPA,CＥA，MMPs，E-钙粘蛋白,β—ｃatｅｎｉｎ，CD44v６与TTF－1。一般认为,不典型腺瘤样增生就是细支气管肺泡细胞癌得癌前病变，TP53阳性就是细支气管肺泡细胞癌得早期标志之一. ④非粘液型细支气管肺泡细胞癌-—－一般大于5mｍ，明显得细胞分层，细胞密集，柱状细胞排列拥挤,微乳头丛生；细胞核重叠,染色质较粗,可见核仁。
４、大细胞癌-－-未分化得非小细胞肺癌，缺乏小细胞癌、腺样或鳞状分化得细胞与结构特征。大细胞癌得分化表型并无特征性，大多表现为腺分化,也可为鳞分化。有少数大细胞癌具有腺、鳞、神经内分泌三相分化表型。 免疫组化：ＡE1/ＡE3几乎全部阳性,EＭＡ70％阳性,35＆5３8；Ｈ1１近７0％阳性。部分病例亦可表达CEA、CＫ7、及Vim。其亚型有① 大细胞神经内分泌癌---常表达神经内分泌标志CgA、Syn与NCAＭ（CD５６)，５0％可表达TTF—1.② 基底细胞癌-－－ ＴTF－1阴性，神经内分泌标志一般为阴性,约10％得病例可表达一个神经内分泌标志。③ 淋巴上皮瘤样癌④ 透明细胞癌⑤ 大细胞癌伴横纹肌样表型
5、腺鳞癌－—-同时具有鳞癌与腺癌成分,各自不少于肿瘤得１０%。表达得CK分子量范围很广,AE１／AE3、ＣAM5、2、KL1与ＣK7阳性,但通常CＫ20阴性。腺鳞癌可表达EＭＡ,TTF-1阳性多见于腺癌部分。 ６、肉瘤样癌－—-就是一组分化差得NSCLC，伴有肉瘤成分或肉瘤样(梭形与/或巨细胞）分化。目前已认知五个亚型. ① 多形性癌② 梭形细胞癌③ 巨细胞癌④ 癌肉瘤⑤ 肺母细胞瘤多形性、梭形与/或巨细胞癌－—-常同时表达CK、Viｍ、CEＡ与平滑肌标志，巨细胞癌可有TTF－１阳性. 癌肉瘤—--上皮成分CK阳性，软骨肉瘤见Ｓ—100阳性，横纹肌肉瘤为肌源性标记阳性。 肺母细胞瘤-—-胎儿型腺癌成分可表达上皮性标志(ＣＫ、EMA、CEＡ)与神经内分泌标志(ＣgA等）。肿瘤细胞可表达特殊得激素，如:降血钙素（cａlcｉtoniｎ）,胃泌素释放肽（gastrin－releasing peptｉde），蛙皮素（bombesin）,亮氨酸（ｌeucine)与甲硫脑啡肽（methiｏniｎe ｅnkephaliｎ)，生长抑素(somaｔoｓtatin） 与5-羟色胺（sｅｒotoｎin).表达ＡＦP极罕见。上皮细胞尤其就是桑葚体可表达claｒａ细胞抗原与ＳＰ。间质细胞为Ｖｉm、MSA、Desｍin、myoｇlobin或S-１00阳性。
7、类癌-—－以神经内分泌分化方式（器官样、小梁状、岛状、栅栏状、缎带样、花环样排列等）为特点。肿瘤细胞具有较一致得形态学特征，如：中度嗜伊红得胞质、细胞核内细颗粒状染色质等.① 典型类癌② 非典型类癌大多数类癌CＫ阳性,ＣD９9阳性率也较高.神经内分泌标志，如：Ｃg、SY、Leu7（CD57）与Ｎ-CAM（CD56)通常为强阳性，尤其就是典型类癌,但在不典型类癌时则可能为灶性。TＴF—1在类癌有表达，文献报道差异较大。Ki—6７在不典型类癌得阳性率高于典型类癌，与预后有关。支持细胞Ｓ—1００阳性。 鉴别诊断: ① 副神经节瘤———CＫ阴性，支持细胞Ｓ-１０0阳性,神经内分泌标记阳性。 类癌—-—CK阳性,支持细胞S—100阳性。 ② 血管球瘤-——SMＡ阳性,神经内分泌标志阴性。
8、唾液腺型癌例：上皮-肌上皮癌——－由肌上皮细胞(梭形细胞、透明细胞或浆细胞样形态得细胞）与含量不等得导管形成上皮所组成得肿瘤。导管内层嗜伊红细胞：CK7,EMA，MNF116阳性。 导管外层透明细胞以及实性成分:Vim，SMA，Ｓ—100阳性。
三、良性上皮性肿瘤 例： 腺瘤1、肺泡状腺瘤—衬覆Ⅱ型肺泡上皮，表达CK（广谱）、CＥＡ、ＳＰ与TTF－
１。间质细胞呈灶性SMA、Act阳性；TTF-1、des、ｐroSPB、proSPＣ与CC１0阴性。 2、状腺瘤—含有Ⅱ型肺泡细胞与Ｃlaｒa细胞，故CK(广谱）、Ｃlarａ细胞蛋白、TＴF-1与表面活性蛋白阳性，也可表达ＣＥA。ＮE标志阴性。 3、唾液腺型腺瘤（粘液腺腺瘤、多形性腺瘤、其她） 4、粘液性囊腺瘤 四、淋巴增生性肿瘤
１、MALT型(黏膜相关淋巴组织)边缘区B细胞淋巴瘤—由具有形态学异质性得小B细胞组成得结外淋巴瘤，类似单核细胞与/或小淋巴细胞得肿瘤细胞在肺内弥漫浸润，散在有免疫母细胞与中心母细胞样细胞.在一些病例中可见浆细胞分化.典型病变为肿瘤细胞浸润支气管黏膜上皮，形成淋巴上皮病变。有时肿瘤间质内有淀粉样变。肿瘤细胞为单克隆B细胞,CD20、CD79ａ与bcl—2阳性。大多数病例表达μ重链,少数为γ或α。ＣＫ可使淋巴上皮病变着色;肿瘤内可有少量反应性T细胞。 鉴别诊断:淋巴细胞性间质性肺炎.MＡLT淋巴瘤呈浸润性生长,使肺泡间隔增宽、机构破坏,淋巴上皮病变更常见.B细胞Iｇ轻链限制,Ig重链基因重排(ＰCＲ检测）. ２、弥漫性大B细胞淋巴瘤-大肿瘤性B细胞增生，细胞核相当于或大于巨噬细胞核,或比正常淋巴细胞大两倍。肿瘤细胞表达B细胞表型（CD２0、CD79ａ）,伴反应性T细胞。在冰冻组织切片中可检测到Ｉｇ轻链表达. 五、间叶性肿瘤
1、上皮样血管内皮瘤—-－就是一种低－中级别血管性肿瘤,由上皮样内皮细胞构成得短条索与巢分布于黏液透明基质中。肿瘤具有突出得上皮样特征，明显得胞浆内空泡,在肺泡内与血管内生长以及中心透明坏死。CＤ31，CD3４，Uｌｅｘ europaeus（荆豆）,F8RA，Fｌｉ-1（ＤＮA结合转录因子ETS家族得成员之一），SMA阳性;CK(±）;EMA，CEA阴性。 2、 血管肉瘤—高级别得上皮样血管内皮瘤。瘤细胞表达CＤ3１、CD34、F8、Fｌi１、ＦＫBP１２(与神经钙蛋白相互作用得胞液ＦK５０６结合蛋白），Vim强阳性、CＫ灶性阳性。 3、 胸膜肺母细胞瘤—－—肿瘤细胞Viｍ阳性;横纹肌母细胞样细胞MＳA与ｄｅｓmｉｎ阳性。 4、 炎性肌纤维母细胞瘤－—－就是广义“炎性假瘤\一种，由多种成分混合而成，如胶原、炎症细胞以及形态温与、显示肌纤维母细胞分化得梭形细胞。同义词有:炎性假瘤、浆细胞肉芽肿、纤维组织细胞瘤与纤维黄色瘤等。梭形细胞Vim、SＭＡ阳性。Ｍyogｅnｉｎ、myｏglobｉn、CD１1７(ｃ-kit）与S—10０阴性。约1/3病例呈局灶性CK阳性（可能就是由于肺泡陷入)。值得注意得就是40％病例表达ALK１与p80。P53阳性很罕见,有报道称可能与肿瘤复发与恶变有关. ５、 淋巴血管平滑肌瘤病-－－一种类似于平滑肌细胞得不成熟短梭形细胞广泛浸润于间质而形成得病变，常伴有囊性变。表现为平滑肌分化与表达，αSMA、desmin与Vim阳性。然而,与正常平滑肌细胞不同得就是，LAM可表达HMB45。一些病例存在EＲ与PＲ. 6、 滑膜肉瘤（单向型、双向型)－—-原发于肺得间叶性梭形细胞肿瘤,可有程度不等得上皮分化区域（组织学类似软组织得同名肿瘤)。Viｍ、CK与／或EMA阳性（梭形细胞很少阳性）,CK7与１9阳性可与其她梭形细胞肉瘤鉴别。瘤细胞可表达bcl—2与ＣＤ９9,1/３病例S—100阳性。CEA、ＣK２0、TTF-1、CD３4与ｄesｍin阴性。 ７、 肺动脉肉瘤—发生于大得肺动脉得肉瘤,有两型:①管腔内型—呈息肉样向管腔内生长，通常显示为纤维母细胞或肌纤维母细胞分化。瘤细胞Vｉm弥漫强阳性,ｏsｔeoponｔｉn（骨桥蛋白)、deｓmiｎ与内皮细胞标志（F８、CD３１与CD34）阳性。②管壁型—在管壁内浸润生长,组织学类似软组织平滑肌肉瘤。 8、 肺静脉肉瘤-－发生于肺静脉得肉瘤，表现为平滑肌肉瘤特点，Vim、ｄeｓmiｎ与actin阳性。4０%病例有异常得kｅratｉn反应性。 六、混杂性肿瘤
1、硬化性血管瘤—--发生在肺部得良性上皮肿瘤，组织学上有显著得共同表现：呈实性、乳头状、硬化与肺泡内出血4种形式。增生得肺泡Ⅱ型细胞呈立方形，被覆在乳头结构得表面。间质得上皮样细胞为圆形，形态较一致。瘤组织内可见胆固醇裂隙、慢性炎症、黄色瘤细胞、含铁血黄素、钙化、分层状得卷轴样螺纹、坏死与成熟脂肪组织。 免疫组化,如下表： 免疫标记 表面细胞 多角形/圆形细胞 ＡE1/AＥ3 + - MNＦ１16 ＋ — CAM5、2 + ＋ CK7 + + CＫ20 － — EMA + ＋ CK５/6 － － Cａｌｒｅｔｉnin - — ChgＡ - — Ｓyn － － Ｌeｕ7 － - SP-A + - pro—SP—B + — Cｌaｒa细胞蛋白 + - TTF－１ + + Vｉm ± ＋ S-100 — — CＥA ± － F8 — - 雌二醇受体 － + 孕酮受体 - + 鉴别诊断： 类癌:CgA、Syn弥漫性强阳性,ＴTF－1阴性。 2、透明细胞瘤---亦称“糖瘤”，可能来源于血管外周得上皮样细胞。肿瘤细胞胞浆透明或嗜酸性，内含丰富得糖原.无肌膜得薄壁窦状血管具有特性。HMＢ－45，ＨMB5０阳性；ＳY,ＣD57，CD3４,ＮSE，S-1０0局灶性阳性。Keｒatｉn阴性。 HE知识总结
染料分类:碱性染料、酸性染料、中性染料 备注:染料得酸碱性就是由于染料分子在水溶液电离后所带得电荷性质决定得，与水溶液得酸碱性无关。
酸性染料：伊红、酸性品红、苦味酸、刚果红、甲基蓝、水溶性苯胺蓝、橙黄—Ｇ。 碱性染料：苏木红、亚甲蓝、孔雀蓝、中性红、甲基绿、孔雀绿、甲苯胺蓝、沙黄等 中性染料:瑞氏染料、姬姆萨染料。 染料原理:
物理作用：毛细作用、吸附作用、吸收与溶解作用、分子间作用力. 化学作用：离子键、共价键、氢键。 媒染与促染
媒染染料:本身与组织作用较弱或者根本不起作用，只有将这类染料先与媒染剂结合,生成色沉淀后才能用于组织染色、常见得苏木精与卡红。
媒染剂：主要就是金属离子得盐类、金属原子得含氧酸 最常见得就是苏木素染料得媒染剂，硫酸铝钾 染料+媒染剂+组织 特点媒染剂多为过渡得金属元素,一至三价得可溶性盐类或氢氧化物，如铝盐、铁盐、明矾与金属含氧酸等。媒染剂与色淀分子就是竞争关系，因此媒染剂要适量，否则影响染料着色。 促染机：催化剂加快反应.如亚甲蓝染液中得氢氧化钾、伊红染色液中得乙酸。促染剂主要就是一些酸或者就是碱，通过影蛋白质所处得酸碱环境影响蛋白质得电离，从而达到促染得目得。 苏木素—伊红染色
氧化
苏木精 苏木红 氧化:自然氧化配置好开口两个月以上通过空气中得氧使之氧化成熟
化学氧化：氧化汞、碘酸钠、过氧化氢、高锰酸钾等 细胞核染色：细胞核主要有核仁、核膜、染色质
核仁主要成份就是组蛋白就是一种碱性蛋白，一般带正电荷,易与酸性染料结合；
染色质得等电点PH３、3～3、6，而染色体得环境ph7、５—７、8，称酸性电离,带负电荷，所以细胞核染色与碱性染料结合
理解：碱性条件 OＨ-带负电因此与碱性染料,带正电荷结合
细胞浆染色：主要就是RNA与脂蛋白，大多数为两性化合物.细胞胞浆得等电点就是ｐH４、７-5、0、细胞得染色效果与ＰH值密切相关，当PH值为3、6—4、７之间时，细胞胞浆中成碱式电离,带正电荷,为酸性染料染色。在ＨE染色过程中,ＰＨ为３、6－4、7之间，伊红染色也不能太久，细胞核与核仁也受到PH得影响，也能与伊红结合，使细胞核得染色发紫。 分化
细胞核:1％得盐酸乙醇分化 ,伊红8５%乙醇分化
蓝化：苏木精只有在碱性条件下才处于蓝色离子状态,水洗去酸化而终止分化，在用流水，温水或者弱碱水就是染上得苏木素变蓝，称为蓝化作用。使用碱液改变细胞得PＨ值，使后续得伊红不容易上色.长时间得伊红得染色使伊红吸附在细胞核上,形成核浆共染现象，就是细胞核呈紫红色。
陈旧切片重新染色
1、在电炉或酒精灯上加热，直至树胶起泡，能拿下盖玻片(一边加热，一边用湿毛巾擦玻片反面,以防止玻片加热不均或过热断裂） 2、放入二甲苯中溶解树胶
3、梯度乙醇去除二甲苯后入水，蒸馏水洗 4、0、25%高锰酸钾水溶液处理5ｍin 5、蒸馏水洗
6、０、5%草酸水溶液漂白1—2miｎ 7、水洗
免疫组化常用标记物
