XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 1. 分析原理 Elecsys E 170/E 411 骨钙素 文件编号：LAB－OP－MY020 1页，共 第 1页 A/0 版本：生效日期：2008-02-01 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 ·第1步：20ml标本、生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗N-MID骨钙素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 ·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 ·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 2. 标本要求 血清：按标准常规方法采集。 血浆：Li-肝素、EDTA-K3 抗凝。 注意：避免溶血，因为血细胞含有的蛋白酶可分解骨钙素。建议立即离心血标本。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂： M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度1.5mg/l，磷酸缓冲液0.01mol/l，pH6.0。含防腐剂。 R2：Ru(bpy)32＋化的抗N-MID骨钙素单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml，浓度1.3mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.0。含防腐剂。 校准品：Elecsys N-MID骨钙素定标液（ N-MID osteocalcin CalSet）货号 质控品：Elecsys 骨标志物质控品（PreciControl Bone）1，2和3货号1972227 其他所需材料： · Elecsys通用稀释液 货号1732277 · Elecsys1010或2010分析仪 · Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号1662988 · Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号1662970 · Elecsys 清洗添加剂液（SysWash）货号1930346 · Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号1298500 · Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean) ）货号11933159 · Elecsys 1010反应杯（Assay Cup) 货号11706829 Elecsys 2010反应杯（Assay Cup) 货号11706802 · Elecsys 2010吸样头（Assay Tip) 货号11706799 4. 仪器和校准 使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准： 每批N-MID骨钙素试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用N-MID骨钙素CalSet定标液定标。
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 定标频率： Elecsys E 170/E 411 文件编号：LAB－OP－MY020 2页，共 第 2页 A/0 版本：生效日期：2008-02-01 每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次， 如再次标定即根据下列要求： Elecsys2010： · 一个月（同一批号试剂） · 7天（放置仪器上的同一试剂盒） Elecsys1010： · 每一试剂盒做一次 · 7天（室温20－25度） · 3天（室温25-32度） 各种分析仪均适用的情况： ·根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。 5. 操作方法 按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。 Elecsys2010： 将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。 Elecsys1010： 将冷藏试剂预温到20??25度后放置于仪器的样品/试剂盘上（室温20－25度），避免产生泡沫。使用前手工打开试剂瓶盖，使用后手工关闭试剂瓶盖并放回2??8度。 6. 质量控制 各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 7. 计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算N-MID骨钙素含量，单位是ng/ml。 8. 参考范围 9. 分析性能 准确性： 以下列出了此试剂盒在Elecsys仪器上的表现。每个实验室结果会不同。 重复性测定采用的是美国临床化学实验室标准委员会修订稿EP5-A标准方法进行评估，使用了Elecsys试剂及人血清池、质控进行测定：连续测定10天，每天测定6次（n＝60次）；E170的批内重复性共测定了21次。结果如下
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411 文件编号：LAB－OP－MY020 3页，共 第 3页 A/0 版本：生效日期：2008-02-01 分析灵敏度（最低检测限）： < 0.5ng/ml 分析灵敏度代表了能与零区别的最低的骨钙素值 分析特异性 由于使用了单克隆抗体，以下物质无交叉反应：骨特异ALP 方法对比： 将Elecsys 骨钙素（y）与另一种骨钙素测定方法（x）使用临床标本进行相关测试： 标本测定总数达：185 Passing/Bablok 线性回收 Y= -2.79 + 1.29x y=-6.24 + 1.43x R=0.987 r=0.987 SD=1.54 Sy.x= 3.28 标本浓度在10至210ng/ml之间。 10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素<100ng/ml干扰。受溶血干扰，血细胞含有的蛋白酶可分解骨钙素。接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。 不受类风湿因子干扰（2200U/ml）。16种常用药物经试验对本测定无干扰。N-MID骨钙素浓度高达4200ng/ml也不出现钩状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。Elecsys N-MID骨钙素测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 11. 结果解释 12. 临床意义 骨钙素是骨基质中最重要的一种特异性非胶原蛋白，其与骨钙的结合作用依赖于维生素K。骨钙素分子含49个氨基酸，分子量约5800D。在骨合成中，成骨细胞产生骨钙素，此过程依赖于维生素K，同时维生素D3有促进产生骨钙素的作用。骨钙素产生后一部分吸收进入骨基质，另一部分释放进入外周血。因此，血清（或血浆）中骨钙素的含量与各种骨
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