消煮炉或可 调电炉上消煮, 开始用小火加热消煮, 待泡沫消失后再加大火力保持微沸状态, 直至溶液透 明呈蓝绿色并继续消煮 2h.
(3将消化的试样放冷,加入 50-60mL 蒸馏水,摇匀,冷却。将蒸馏装置冷凝管末端浸 入内装 25mL 2%硼酸溶液的三角瓶底部,加入 2滴混合指示剂。然后小心地向消化液内加 入 50mL40%氢氧化钠溶液, 立即进行加热蒸馏, 直至馏出液体体积为 100mL 为止。 取下三 角瓶使冷凝管末端离开液面,继续蒸馏 1-2min ,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,停止蒸馏。
(4滴定:用 0.1mol/L 盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变为红色为终点。 (5空白测定:称取 0. 5g 蔗糖代替试样,按上述操作步骤测定。 5.结果计算
(1饲料中粗蛋白质的含量按公式计算
式中:w(CP —饲料中粗蛋白的质量分数,%; V —滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积, mL V 0—滴定空白时所消耗的标准盐酸溶液体积, mL C B —标准溶液盐酸的量浓度, MryLI 0.0140 —氮的摩尔质量, kg/mol; m —试样质量, g
(2每试样取两个平行样进行测定,取平均值为分析结果方法允许相对偏差≤ 5%。 6注意事项
(1方法的可靠程度可用硫酸铵代替试样进行测定氮含量,与化学式计量氮作比较,误 差应为±0. 2%。例如,准确称取 0.2000g 硫酸铵测定含氮量应为 (21.19±0. 2 %
(2如果试样中蛋白质含量高,可适当减少称样量,同时考虑蒸馏完全的问题,可适当 多蒸几分钟,以保证蒸馏完全,防止对下一个样品造成的记忆效应。
(3凯氏定氮法己沿用了 l00多年, 目前已有全自动定氮仪, 这类仪器从消化、 蒸馏到 滴定可自动完成,但仪器价格较贵。目前国产半自动定氮仪实际上是一套蒸馏装置,消化、 滴定还要另行试验。
(4GB6432— 94 国标方法中规定样品消化时要加入玻璃球以防爆沸,但我们的经验证 明,由于加入大量混合催化剂呈颗粒状,不产生爆沸,故无需加入。另外,本实验考虑消化 需要回流过程和减少蒸馏逸出造成的氨损失,建议消化管或凯氏瓶要加盖消化。
(5国标方法中使用邻苯二甲酸氢钾作为基准物标定盐酸溶液。实际上使用无水碳酸钠 基准物质标定盐酸溶液也是很方便的。
(四 粗脂肪
粗脂肪包括了饲料中可溶于乙醚的所有成分,故又称乙醚浸出物。通常用索氏抽提器 回流浸提饲料样品进行粗脂肪的测定。
按照国标 GB /T6433— 94,饲料中粗脂肪的测定方法适用于各种单一饲料、混合饲料 和配合饲料的分析。
1原理
采用索氏 (Soxhlet脂肪提取器用乙醚抽提试样,抽提物的总质量为粗脂肪含量。
2.仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵 . (2试验筛:孔径 0. 42mm(40 目 (3分析天平:分度值 0.0001g (4电热恒温水浴锅:室温 -100℃。 (5鼓风电热烘箱:50-200℃。
(6索氏脂肪提取仪 (带球形冷凝管 100-150mL (7滤纸或滤纸筒:中速,脱脂。
(8干燥箱:变色硅胶或无水氯化钙作干燥剂 3试剂 无水乙醚(AR 4.分析步骤
(1选取有代表性的试样, 用四分法缩分至 200g , 风干或以 65℃烘干后粉碎, 过 0.42mm 试验筛,混匀封于样品袋内,于阴凉处保存,以备分析。
(2索氏提取器应干燥无水, 把抽提瓶 (内装数粒沸石 在 (150±2 ℃ 烘箱内烘干 1— 2h , 取出放入干燥器内冷却 30min , 称量。 再烘 30min , 同样冷却, 称重。 两次称量之差小于 0. 0008g 为恒重。
(3视饲料中脂肪含量称取 l — 5g(准确至 0. 0002g 置于滤纸筒内,或用滤纸包好,放入 l05℃烘干 1— 2h ,取出放入抽提器内,滤纸包应完全浸入乙醚,向抽提瓶内加 60-100mL 乙 醚,装好回流装置,在 65-75℃水浴上加热回流,控制乙醚回流速度为每小时 8-10次,共回 流 50-70次。
取出试样,仍用原抽提瓶回收乙醚,取抽提瓶,在水浴上蒸除残存乙醚。
(4将抽提瓶外水分擦干, 放入 (150±2 ℃烘箱内烘干 2h , 取出放入干燥器内冷却 30min ,
称量。同样再烘 lh ,冷却,称量。两次称量之差小于 0.001g 为恒重。 5结果计算
(1饲料中粗脂肪的含量按公式计算
式中:w(EE——饲料中粗脂肪的质量分数,%: m 2——己恒重的抽提瓶质量, g ;
m l ——己恒重的拍提瓶和粗脂肪的总质量 m ——风干试样质量, g 。
(2母个试秤取两个平行样测定,取平均值作为分析结果相对误差应小于 5%。 6.注意事项
(1本文介绍的方法又称为油重法, GB/T6433— 94中称为仲裁法。如果样品数量多, 又不作为仲裁,可采用减重法。将风干样称量装入于 105℃烘干恒重的滤纸筒内,包好,在 105℃烘干,冷却称量。放入拍提瓶内抽提 50— 70次。取出滤纸包,吹干乙醚,放入 (105±2 ℃烘箱内烘干 2h. 取出放入干燥器内冷却 30min ,称量。滤纸包的减量为粗脂肪含量。 该方法抽提器内一次可放 3-5个样品抽提。由于样品量大,抽提次数可适当多些。
(2目前,全自动脂肪测定仪已有销售,使用这类仪器可按仪器说明书操作。 (五 粗纤维
粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分,它包括纤维素、半纤维素、多缩戊糖、木质素 及角质素等成分。 粗纤维影响饲料的消化, 但适宜的水平对动物是必需的。 测定饲料中粗纤 维的含量是控制饲料中适宜的粗纤维水平的前提。 通常用稀硫酸和稀 Na0H 溶液溶解饲料样 品,不溶性残渣为粗纤维。
概略养分分析法测定粗纤维时,由于部分半纤维素、木质素溶解于酸、碱中,导致结 果出现误差。 V an Soest(1976腾出了改进方案, 用中性洗涤纤维 (NDF 、 酸性洗涤纤维 (ADF、 酸性洗涤木质素 (ADL,作为测定饲料中纤维性物质的指标。
国标 GB /T6434-94 饲料中粗纤维的测定方法适用于各种混合饲料、配合饲料、浓缩 饲料和单一饲料。牧草、青贮等饲料中粗纤维高达 60%— 80%(干物质计 ,而精料中,如玉 米、豆粕中粗纤维不过 2%— 4%。
1 原理
饲料用稀酸和稀碱在规定条件下分别进行消煮,再用乙醇除去可溶物,经高温灼烧后 扣除矿物质所剩余的物质总称。 主要包括纤维素、 半纤维素、 木质素和少量杂质, 如果胶等。 2仪器设备
(1植物样品粉碎机或研钵。 (2试验筛:孔径 1mm 。 (3分析天平:分度值 0. 0001g 。 (4可调电炉。 (5高温电阻炉。 (6电热恒温箱。
(7消煮器:有冷凝球的 600mL 高型杯或有冷凝管的瓶。
饲料中基本营养成分测定标准（精）
