RP-HPLC法测定天山雪莲口服液中绿原酸及芦丁

RP-HPLC法测定天山雪莲口服液中绿原酸及芦丁

贾丽华1， 凯赛尔·阿不拉2

【摘 要】摘要:目的 建立RP-HPLC法测定天山雪莲口服液中绿原酸及芦丁的方法。方法 反相高效液相色谱法。色谱柱为Symmetry ShieldTmMRP18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.4%磷酸溶液洗脱;体积流量为 1.0 mL/min;柱温为 40 ℃;检测波长为340 nm;进样量为10 μL。结果 绿原酸及芦丁的线性范围分别为0.101 9～1.426 6 μg(r=0.999 9)，0.105 6 ～1.478 4 μg(r=0.999 9)。加样回收率分别为 98.6%(RSD 为2.42%)，102.7%(RSD 为 1.43%)。结论 本方法操作简单，灵敏，准确，重现性好，可用于天山雪莲口服液的的质量控制。 【期刊名称】中成药

【年(卷),期】2011(033)006 【总页数】3

【关键词】关键词:天山雪莲口服液;绿原酸;芦丁;RP-HPLC

天山雪莲口服液是以菊科风毛菊属植物天山雪莲(Sau- ssurea involucrata Kar.et Kir.)Sch.-Bp.为原料，运用现代技术研制而成的纯天然单味口服制剂。本品收载于《国家中成药标准汇编》经络肢体脑系分册［1］，其测定方法为以芦丁作对照，用紫外分光光度法测定总黄酮量，缺乏专属性。文献报道天山雪莲中的紫丁香苷为其有效成分之一，其质量分数为0.232 mg/g［2］。曾经采用高效液相色谱法，对天山雪莲口服液中紫丁香苷的测定进行了研究，以进一步探索专属性较强的质量控制方法。然而天山雪莲口服液中紫丁香苷量较低，平均每1 mL 含0.03 mg［3］，不适宜作含测指标。天山雪莲药材主要含芦丁、

槲皮素、高车前素、柯伊利素、木犀草素等黄酮类，大苞雪莲碱等倍半萜内酯类，挥发油类，还有绿原酸、紫丁香苷、多糖等成分［2-9］。高车前素、柯衣利素及大苞雪莲碱等无对照品可供用于测定。天山雪莲药材中绿原酸及芦丁的定量测定已收载于《中国药典》2005年版一部［5-6］，为保证天山雪莲口服液质量的可控性，采用HPLC法对其所含成分绿原酸和芦丁同时进行了测定，该方法简单易行，重复性好，可用于天山雪莲口服液的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪，包括Waters 1525双元高压泵，Waters 2487双通道紫外检测器，Waters 717自动进样器，Brezee色谱工作站;BP211D电子天平(赛多利斯公司);KLZ-UP高端超纯水机(台湾艾柯成都康宁实验专用纯水设备厂)。

1.2 试药 绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110753-200212供含量测定用)。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0880-9705供定量测定用)。甲醇为色谱纯(Fisher公司)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。天山雪莲口服液(新疆天山雪莲制药有限公司，批号20040208， 20040628， 20040804， 20040921， 20050606，20050711，20050824，20050930)

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Waters Symmetry shieldTMRP18(4.6 mm ×150 mm，5 μm，Ireland);以乙腈为流动相 A，0.4% 磷酸溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min，柱温为30 ℃;检测波长为340 nm［5］;进样:10 μL 测定。在以上色谱条件下，与其它组分分离度良好，见色谱图1。

2.2 对照品溶液制备 分别精密称取120℃减压干燥至恒重的芦丁，和绿原酸对

照品各适量，加50%甲醇制成每1 mL含芦丁100 μg、绿原酸40 μg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品10 mL，置25 mL

量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，作为供试品溶液。

2.4 标准曲线及线性关系考察 精密称取绿原酸对照品10.19 mg及120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.56 mg，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇适量溶解并定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含绿原酸1.019 mg及芦丁1.056 mg的贮备液，精密吸取此贮备液 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每 1 mL 含绿原酸0.010 19、0.020 38、0.040 76、0.061 14、0.081 52、0.101 9、0.122 28、0.142 66 mg 及芦丁 0.010 56、0.021 12、0.042 24、0.063 36、0.084 48、0.105 6、0.126 72、0.147 84 mg的系列浓度对照品溶液，分别进10 μL，以进样量X(μg)为横坐标，峰面积的积分值Y为纵坐标进行线性回归。各组分回归方程，相关系数，线性范围见表2。

2.5 精密度试验 取绿原酸与芦丁混合对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积，结果绿原酸的 RSD为0.34%，芦丁的RSD为0.16%，显示精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一样品(20050930)，按2.3项下的方法分别制备6份供试品溶液，按测定法进行测定，结果绿原酸，芦丁质量浓度分别为 0.106 mg/mL，0.289 mg/mL，RSD分别为1.66%，1.73%。结果表明，该方法重复性良好。