HPLC结合响应面分析法优化提取瑞香狼毒中西瑞香素的含
量研究*
辽宁中医药大学
【摘 要】提要 目的：应用响应面分析法优化瑞香狼毒中西瑞香素的提取工艺。方法：以瑞香狼毒的根为原料，在单因素的基础上，应用Box-Behnken 设计实验组别，采用超声提取法，选取乙醇浓度、液料比和提取时间3因素，以瑞香狼毒中西瑞香素含量和干浸膏的得率为指标，高效液相色谱法(HPLC)进行检测，确定瑞香狼毒中西瑞香素的最佳提取工艺。结果：瑞香狼毒中西瑞香素提取工艺的最佳条件为：提取时间50 min，乙醇浓度90 %，液料比7.5∶1 (mL/g)；根中西瑞香素的含量为188.55 μg/g，干浸膏得率32%；HPLC最佳检测条件为：检测波长360 nm，柱温：30℃，流动相为乙腈与1%冰乙酸水溶液，色谱柱：Inertsustain C18(4.6 mm×260 mm,5 μm) ，梯度洗脱。结论:运用该方法结果稳定、可靠，可为后期瑞香狼毒的开发和利用提供依据。 【期刊名称】《河北中医药学报》 【年(卷),期】2019(034)005 【总页数】5
【关键词】关键词 瑞香狼毒；西瑞香素；响应面分析法 ；高效液相色谱法；提取工艺；优化 【文献来源】
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-hebei-traditional-
chinese-medicine-pharmacology_thesis/0201275146822.html
方 药 研 究
* 河北省中医药管理局资助项目：No.2015171；河北省教育厅大学生创新创业
训练项目：No.201810092012；河北北方学院博士基金课题项目：No.BSJJ201817
瑞香狼毒又名断肠草、山萝卜等,一般药用部位为瑞香科植物(Stellera chamaejasme L.)的干燥根[1],是我国西北、内蒙古、黑龙江等地一种分布广泛的植物。瑞香狼毒主要含黄酮类、二萜类、香豆素类化合物等化学成分。1985年，前苏联学者 Modonova[2]从瑞香狼毒的地上部分第1次分离并鉴定出西瑞香素，但其含量尚未进行测定。西瑞香素是香豆素类化合物中的1种，具有多方面的生物活性。有实验证实，西瑞香素对宫颈癌细胞[3]、骨肉瘤细胞[4]、肺癌细胞[5]有抑制作用，并促进细胞凋亡。因此本实验以瑞香狼毒中西瑞香素和干浸膏得率为指标，采用HPLC结合Box-Behnken响应面分析法确定并优化了西瑞香素的提取工艺，以期为研究瑞香狼毒中西瑞香素的抗肿瘤活性、药理药效和药材的质量控制提供基础。
1 实验材料
1.1 药材 瑞香狼毒采自河北省张家口市尚义县，经河北北方学院刘贵河教授鉴定为瑞香科植物瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)。取瑞香狼毒的根，阴凉晒干，粉碎成粗粉，保存备用。
1.2 仪器 岛津高效液相色谱仪(LC-20AT泵)；色谱柱：Inertsustain C18(4.6 mm×260 mm,5 μm)；SB-5200DT超声清洗机 (宁波新芝生物科技股份有限公司)；UV759紫外分光光度计(上海精密科学有限公司)；DFY-1000粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；HH-S6恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)；BS224S分析天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市子华仪器有限责任公司)；RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)等。
1.3 试剂 乙腈(MREDA技术公司，批号M157-4，色谱纯)，甲醇(MREDA技术公司，批号67-56-1，色谱纯)，冰乙酸(张家口化学制剂厂，批号64-18-7，分析纯)；对照品西瑞香素，纯度>98%(采自中国食品药品检定研究院，批号111758-201101)。
2 响应面分析实验方法
2.1 单因素实验设计 称取瑞香狼毒根部粗粉5 g,保障其他因素不变的情况下，分别考察提取时间、乙醇浓度和液料比3个影响因素对西瑞香素提取的影响。筛选出各因素最适提取条件。
2.1.1 提取时间：在乙醇浓度85%，液料比8∶1(mL/g)不变的条件下，考察提取时间20、40、60、80 min对西瑞香素提取的影响。
2.1.2 乙醇浓度 在提取时间60 min，液料比8∶1(mL/g)不变的条件下，考察乙醇浓度为 65%、75%、85%、95%对西瑞香素提取的影响。
2.1.3 液料比：在乙醇浓度85%，提取时间60 min不变的条件下，考察液料比6∶1(mL/g)、8∶1(mL/g)、10∶1(mL/g)、12∶1(mL/g)对西瑞香素提取的影响。
2.2 实验设计 选取提取时间(A),乙醇浓度(B)，液料比(C)3个因素，运用Box-Behnken 设计实验，每个因素设3个水平，用-1、0、+1表示，详见表1。响应面设计方案，详见表2。 2.3 含量的测定及结果
2.3.1 检测波长和流动相条件确定:精密称取对照品西瑞香素1 mg，用甲醇定容到25 mL的容量瓶中，即西瑞香素对照品溶液浓度为0.04 mg/mL。对西瑞香素对照品甲醇液采用紫外全波长200～700 nm扫描，以确定HPLC检测波长。
HPLC结合响应面分析法优化提取瑞香狼毒中西瑞香素的含量研究
