HPLC法测定猪尿酸酶活性

HPLC法测定猪尿酸酶活性

陈 思，李 辉，马娇颖，谢光蓉，陈建华

【摘 要】建立了一种测定重组猪尿酸酶活性的高效液相色谱方法。将重组猪尿酸酶基因工程菌的粗酶液与尿酸溶液反应5 min，加入高氯酸溶液终止，经超滤后以体系中尿酸浓度的降低值为指标，采用HPLC法[色谱条件：Agilent Zorbax 300SB-C18色谱柱、流动相为磷酸-甲醇-双蒸水(3∶25∶472，体积比)、流速1.0 mL ·min-1、波长292 nm]测定粗酶液活性。结果表明，尿酸在10～500 μmol·L-1范围内线性关系良好,样品回收率在99%～104%之间。该方法不受杂质干扰、稳定、灵敏度高，适用于尿酸酶粗酶液活性的检测。 【期刊名称】化学与生物工程 【年(卷),期】2012(000)006 【总页数】4

【关键词】基因工程菌；尿酸酶；酶活性；高效液相色谱

尿酸酶(Uricase，EC 1.7.3.3)是一种以氧作为受体的氧化酶，能够催化尿酸氧化生成尿囊素、CO2和H2O2。大多数哺乳动物和禽类体内含有尿酸酶，可将核酸组成单位中嘌呤核苷酸代谢的产物尿酸分解成尿囊素，而人和猿类体内缺乏尿酸酶，所以以尿酸形式直接排出体外。尿酸及其盐类在水中溶解度很低，在某些病理情况下，由于嘌呤代谢紊乱，血液中尿酸积累过多，会导致高尿酸血症，继而引发痛风综合症。尿酸酶可以将尿酸氧化成尿囊素，从而降低痛风病人体内的尿酸水平，进而消除痛风病人痛风性关节炎、痛风石沉积及尿酸肾结石形成等症状[1]。

目前测定尿酸酶活性的方法主要是紫外分光光度法，该方法虽操作方便，但存