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免疫学实验指导
生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用
玉萍
[分组]：4人/组 ，实验用动物、器材以每组需要量设计
[班级] 2006生物工程 、生物技术 [学生人数]：65人/58人 。 分16组/15组 [时间] 2008年3月—2008年7月 两周一次4学时。
目 录
实验一、免疫学实验动物的一般操作
实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察
实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法 实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验 实验五、IgG的分离和纯化
实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定) 实验七、环状沉淀试验
实验八、琼脂扩散试验（单向） 实验九、巨噬细胞吞噬功能试验 实验十、白细胞吞噬试验
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实验一、免疫学实验动物的一般操作
[实验原理]
实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。 [目的要求]
1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）
2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。[自学] 3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。 4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。 5、练习小白鼠的取血方法。
6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。 [实验动物] 小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。 [试剂]
⑴ 3%来儿或3%石炭酸 100~150 ml/组；
⑵ 无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染色用）。
⑶ 3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组（带滴管,编号用）； ⑷ 5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；
⑸ 瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）； *抗凝剂一支
[器材]
⑴ 1ml注射器及针头2支/组；
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⑵ 碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；
⑶ 手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组； ⑷ 毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组 ⑸ 显微镜6台/组 [6] 鼠笼1个/组 [操作步骤]
1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮注射、腹腔注射的方法。（见《免疫学实验》P9-13。
2、练习小白鼠尾静脉取血法。（P15）
实验报告要求：
1、时间、地点、操作人、同组人、指导老师。 2、实验原理、目的要求
3、实验操作记录（实验步骤、结果）
4、分析总结：依据实验原理、目的要求，分析总结实验是否成功，是否达到实验目的？为什么？
5、对实验动物编号有何实际意义，你对书中关于小白鼠的编号方法有何想法？有无更简便、实用的方法？
6、若给动物注射传染性材料应注意些什么？
实验二、免疫器官与免疫细胞观察
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[实验原理]
免疫器官、免疫细胞是动物免疫系统的主体。在胸腺、脾脏中有大量淋巴细胞存在，在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在，发挥着免疫监视作用。 [目的要求]
1、练习血涂片的制作
2、学习小鼠颈椎脱臼致死的方法，观察小白鼠的解剖结构；
3、学习脾脏、胸腺的触片制备与染色方法；观察小鼠脾脏触片、血液涂片中的免疫细胞，并画图。 [方法与步骤]
1、练习血涂片的制作（3/组）
1）准备一洁净玻片，取血1滴于玻片右侧,另取一光边玻片的一端,放在血滴前方,并逐渐后移接触血滴,血液立即沿推片散开,然后将推片与载片保持30一45度角,平稳地向前推动,至玻片另一端,载玻片上便留下一层血膜。良好的血膜象舌头,头、体、尾鲜明,厚薄适宜、分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。
2）染色：
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A、瑞特氏(WrightFs)染色法：
①.血涂片制成后可在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。选择良好的血片，用特种玻璃铅笔画出两边界限(注意保留尾部，因体积大的细胞往往在此出现)，以防染液外溢。
②在血膜上滴加几滴瑞氏染色液,左右晃动，使染液完全覆盖血膜，注意染液不宜过多而溢出界限，亦不能过少而干燥。
③1—2min后，滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水，2—3min后，可见表面有金属光泽，即可用清水轻轻冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。在正常的情况下，血膜外观染成粉红色。
3）镜检：先在低倍镜下检查血片，染色是否合格，血细胞分布是否均匀等,然后换高倍镜或油镜观察，并绘图，指出淋巴细胞与白细胞、红细胞。如自己图片不成功，则对教学片进行观察和绘图。
结果：
血液涂片瑞特氏染色法染色的结果：
中性粒细胞：是白细胞中数量最多的细胞，胞体大于红细胞，细胞核蓝紫色，呈分叶形，可分2—5叶。叶间有细丝相连；细胞浆为粉红色，其中充满褐灰色的小颗粒。
嗜酸性粒细胞：数量少，占白细胞总数的0.5—3%。胞体较中性粒细胞大，胞核蓝色，颗粒粉红色。
嗜碱性粒细胞：细胞核蓝紫色，颗粒蓝色。 红细胞数量最大，边缘厚（浓染），中央薄（淡）。 淋巴细胞细胞质天蓝色，细胞核几乎占据整个细胞。
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免疫学实验指导
