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建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证

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建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证

1040314 潘明

对原实验选用方法进行改进的原理:

黄芩苷有两个最大吸收波长,分别为278nm和315nm,因为双黄连口服液中另一主要成分绿原酸的最大吸收波长为326nm,为保证得到良好峰形,仍采用278nm为检测波长。黄芩苷为黄酮类化合物,有多酚羟基结构,在低温和酸性条件下稳定,一般将pH控制在3-4之间。原实验用冰醋酸调节pH,但醋酸有易挥发不稳定的缺点,所以改用0.4%的磷酸溶液(低浓度减少磷酸盐对色谱柱的侵蚀),流动相为甲醇-0.4%磷酸(50∶50 )。

改进后实验条件:

色谱柱:C18(250mmX4.6mm,5μm ); 流动相:甲醇-0.4%磷酸(50∶50 ) 流速:1.0ml/min 进样量:20μl 柱温:室温

理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1500

样品含量的测定方法:

取样品溶液,按上述色谱条件,进样测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。

方法学验证:

1.专属性实验

空白溶液:甲醇-0.4%磷酸(50∶50 ) 黄芩苷对照品溶液制备:精密量取黄芩苷对照品适量,精密称定,制 成0.1mg/ml溶液

供试品溶液:精密量取双黄连口服液1ml,置50ml量瓶中,加50%甲醇

适量,超声波处理20min,放置至室温,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得

不含黄芩苷的阴性对照供试品溶液制备:原则上需要,制备复杂,本实验不做

取上述溶液分别进样,测定,观察在相同位置上是否有与标准品溶液对应的峰,表明空白对照无干扰

2 回收率实验

取制得的供试品溶1ml置于10ml容量瓶中,共6份 。精密量取黄芩苷对照品0.013g,0.016g和0.019g各两份,分别加入上述6份溶液中,依法测得其含量,并计算回收率。(加入的标准品一般为供试品含量的80% 100% 120%)

加样回收率=(测得量-本底量)/加入量 ×100%

3.线性范围考察

精密量取上述黄芩苷对照品溶液1,2,3,4,5,6m1分别置于lOml量瓶中,加5O% 甲醇稀释至刻度,按上述色谱条件,分别取20μl进样,记录色谱图。以峰面积y对对照品进样量(mg/ml)线性回归,得黄芩苷标准曲线。

4 精密度实验

(1)进样精密度:取供试品溶液20μl,重复进样6次,计算RSD (2)重复性:精密量取同一批号样品6份,按样品溶液的制备方法,分别配置供试品溶液,测定黄芩苷的含量,计算RSD。

(3)中间精密度:取同一批样品,甲乙两个操作员在两台不同的一起上分别独立操作,计算RSD(一般仅在报批时测定,本实验不做)

5.检测限与定量限

信噪比3:1测检测限,信噪比10:1测定量限

6.供试品稳定性实验

取重复性实验中的第一份溶液,室温下在0,3,6,9,12 小时测定,结果表明,本品的供试品溶液在室温12小时内基本稳定

7.重现性实验

在不同的实验室,不同的工作人员,不同的仪器,不同的化学试剂来源的条件在测定(一般仅在报批时测定,本实验不做)

8.耐用性实验

改变流动相的组成,流速和pH值,不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱,柱温。考察条件改变对分析结果的影响及影响大小(本实验不做)

下面是古文鉴赏,不需要的朋友可以下载后编辑删除!!谢谢!!

建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证

建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证1040314潘明对原实验选用方法进行改进的原理:黄芩苷有两个最大吸收波长,分别为278nm和315nm,因为双黄连口服液中另一主要成分绿原酸的最大吸收波长
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