生地黄与熟地黄中5个苷类成分和总多糖的含量比较

生地黄与熟地黄中5个苷类成分和总多糖的含量比较

张留记1，王建霞2，屠万倩1*，李向阳3，张军霞3，王晓燕3，周志敏1 【摘 要】建立测定地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷及总多糖含量的方法，比较生地黄与熟地黄中成分含量的差异。采用HPLC法同时测定了生地黄和熟地黄中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量。采用UV法测定了生地黄和熟地黄中总多糖的含量。结果表明，生地黄炮制成熟地黄后，梓醇、地黄苷D、益母草苷和毛蕊花糖苷的含量均出现不同程度的降低，而异毛蕊花糖苷和总多糖的含量增加。本文所建立的同时测定梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷含量的方法及总多糖的含量测定方法，可用于控制生地黄和熟地黄的质量。不同炮制方法对熟地黄中上述成分的含量产生一定影响。 【期刊名称】天然产物研究与开发 【年(卷),期】2019(031)004 【总页数】6

【关键词】地黄；熟地黄；苷类成分；总多糖；含量测定 接受日期：2019-02-18

基金项目：河南省科技攻关计划 (102102310018)

地黄主产于河南、陕西、山东、山西等地，其中河南焦作地区武陟、温县、孟县等地所种植的地黄被称为“怀地黄”，是道地药材品种“四大怀药”之一。生地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根，性甘、寒，归心、肝、肾经，清热凉血，养阴生津，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血等。熟地黄为生地黄的炮制加工品，性甘，微温。归肝、肾经，补血滋明、

益精填髓，用于血虚萎黄，心悸怔忡，肝肾阴虛等症[1]。熟地黄的传统炮制方法较多，有蒸制、酒制、姜汁制、砂仁制、蜜制等[2]，中国药典中收录了酒炖法和蒸法两种熟地黄的制法。熟地黄的蒸制法加工最早文献记载见于汉代《金匮要略方论》，唐孙思邈《千金翼方》中记述了熟地黄蒸制时“ 古法九遍止”，即九蒸九晒法蒸制熟地黄的炮制方法[3]。

地黄中主要活性成分为苷类和多糖，其中环稀醚萜苷类成分为梓醇、益母草苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷A、B、C、D等；苯乙醇苷类成分为毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷等[4-6]，梓醇等环烯醚萜苷类成分和地黄多糖具有脑缺血保护作用、降血糖作用[6]，毛蕊花糖苷等苯乙醇苷类具有降血脂、抗高血脂所致的血管内皮细胞凋亡和氧化损伤等多种活性[7]，地黄多糖具有抗衰老、抗肿瘤、抗氧化、抗焦虑、增强免疫力等作用[8]。《中国药典》2015年版一部地黄项下采用梓醇和毛蕊花糖苷作为定量指标，熟地黄项下采用毛蕊花糖苷作为定量指标。本文分别按现代工艺和九蒸九晒传统方法制备了熟地黄，采用HPLC法同时测定了生地黄和熟地黄样品中梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷等5个苷类单体成分的含量，采用UV法测定了总多糖的含量，比较了在从生地黄到熟地黄的传统与现代炮制方法的生产加工过程中，苷类成分和多糖含量的差异，为进一步探讨生地黄和熟地黄的药性和临床功用差异与炮制加工过程中化学成分变化的关联性及开展地黄及其炮制品的药效物质基础研究提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

2695 高效液相色谱仪(美国Waters公司)；UV-265FS紫外分光光度计(日本岛

津公司)；LIBROR-160 DPT万分之一天平(日本岛津公司)；AE240十万分之一天平(瑞士Mettler公司)SB-5200DT超声波提取器(宁波新芝生物科技股份有限公司)；ULUP-IV-10T超纯水器(四川优谱超纯科技有限公司)。 1.2 材料

实验用生地黄2016年购自河南省武陟县，经河南省中医药研究院都恒青研究员鉴定为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根。梓醇(批号：110808-201210)，D-葡萄糖(批号：833-201001)，均购自中国药品生物制品检定所；地黄苷D(批号：150412，纯度≥98%)，益母草苷(批号：140213，纯度≥98%)毛蕊花糖苷(批号：151121，纯度≥98%)，异毛蕊花糖苷(批号：150617，纯度≥98%)，均购自四川省维奇其生物科技有限公司。甲醇、乙腈(美国Fisher Chemical公司)均为色谱纯；水为自制超纯水；SP825L大孔吸附树脂(日本三菱化学)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 熟地黄的制备[9，10]

现代工艺制熟地黄：取生地黄， 加适量水闷润后，125 ℃加压(150 kPa)蒸制2次，每次2 h，70 ℃烘干。

九蒸九晒制熟地黄：取生地黄适量，加适量水浸润2 h，置蒸锅中蒸约6 h，至黑润无硬心，取出，晾至汁液吸干， 70 ℃烘干约2 h至表皮微干，为一蒸一晒，此后每次蒸制约2 h，至蒸透，如此反复8次，即得九蒸九晒熟地黄。 2.2 梓醇、益母草苷、地黄苷D、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量测定[11] 2.2.1 对照品溶液的制备

分别取梓醇、地黄苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷对照品适量，