CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测
1 范围
本章规定了用多平台三级程序法和单平台一步法检测全血中的CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞。 2 规范性引用文件
1997 Revised Guidelines for Performing CD4+ T-Cell Determinations in Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus (HIV) MMWR 46(RR-2);1-29 Publication date: 01/10/1997。
3 实验室条件 3.1 人员
进行HIV感染者CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。
3.2 设施和设备
3.2.1 样品处理区：生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器（5μl~50μl、20μl~200μl、200μl~1000μl）。
3.2.2 流式细胞仪检测区：流式细胞仪 3.3 功能分区
实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区,各区的功能是：
3.3.1 样品处理区应达到生物安全Ⅱ级（BSL-2）实验室要求，用于样品处理、流式检测样品制备。
3.3.2 流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。 4 样品采集、运输和接收 4.1 样品的采集
4.1.1 选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。 （1） EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。
（2）在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过30h，不检测超出抗凝时间范围的样品。
（1）用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。 （2）用ACD或肝素抗凝，收集样品在48h以内，尽早（8h以内）处理。
4.1.2 静脉采血收集血样，将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管（用真空试管）。 4.1.3 准备适当数量的样品管
4.1.4 对所有样品编号，并写明日期和收集时间。 4.2 样品运输
4.2.1 在室温下（18~23℃）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过热）。超过37℃的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天气热时，需要用一个隔热的容器装样品，并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。这种方法有助样品的保存。
4.2.2 尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。
4.2.3 如需运送样品到其它地点时，应将装样品的试管放于一个防漏的容器中，并将此容器放于一个装有充足的吸水性物质的纸罐中，以防止震动并可吸收所有因试管破裂漏出的血液。盖紧纸罐，用橡皮带系紧。
4.2.4 应选择特定的方案，并且安排合适的时间收集和运输样品。 4.3 样品接收
4.3.1 样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。 4.3.2 如有以下现象发生，采取正确的方法处理： 5 方法
目前用于CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞计数的检测方法分为自动检测方法和手工操作法。自动检测方法包括流式细胞仪（主要采用单平台一步法）和专门的细胞计数仪，手工操作法包括几种手工操作试验，需要显微镜或酶联免疫试验设备。
6 实验资料的记录
6.1 实验应及时、准确地记录结果。
6.2 实验记录中应包括以下内容：日期、操作者、所有样品、实验内容、过程（步骤）、结果及有无事故等。
6.3 整个实验室的实验资料要统一有专人负责，按固定格式记录在案。
6.4 计算机生成的实验结果，存档备案；定期拷贝计算机结果文档，备案保存。
7 结果报告
7.1 按照实验结果填写CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测报告单，检测人员签字。
7.2 根据CD命名标准报告数据，用一个简短的描述解释命名的意义。注意：CD4+T细胞是指辅助性T细胞。正确的报告CD4+ T细胞应该是那些CD4+ 和CD3+ 双阳性的细胞。同样地，CD8+ T细胞是T-suppressor/cytotoxic细胞，为CD3+ 和CD8+ 双阳性的细胞。在CD4+ 和CD8+ 的判定中重要的是排除其它细胞（非T细胞）的干扰。
7.3 以全部淋巴细胞的百分比报告数据，并且修正门内淋巴细胞纯度。例如，如果淋巴细胞纯度是94%，而CD3值为70%，可以通过0.7除以0.94乘以100得到74%，修正CD3的值。 7.4 为检测免疫亚群而取血的同时，用该血样作自动测定全血细胞（CBC）计数白细胞（WBC）及分类测定，报告淋巴细胞亚群绝对数值。
7.4.1 用淋巴细胞的总数（来自于WBC及分类）乘以淋巴细胞亚群的百分率（从流式细胞仪的数据中得到），计算绝对数值。
7.4.2 如可能，应报告计数的百分率和绝对值。
7.5 单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单，报告单的内容包括如下结果：CD45+ Abs Cnt；CD3+ Abs Cnt；CD3+ CD4+ %T Lym；CD3+CD4+ Abs Cnt；CD3+CD8+ %T Lym；CD3+CD8+ Abs Cnt；Th/Ts及其正常参考值范围(BD公司建立的正常参考值范围见表3)，检测人员签字。
表3 BD公司应用单平台一步法建立的正常参考值范围表 项 目 CD3+/ CD45+ CD3+绝对数 CD3++ CD8+/ CD45+ CD3++ CD8+绝对数 CD3++ CD4+/ CD45+ CD3++ CD4+绝对数 CD4+/ CD8+比值 *另有报告： ①0.68-2.47（中华检验医学杂志，2003，26（2）：123-125） ②0.71-2.87（中华检验医学杂志，1998，21（4）：223-227）
单 位 % 个/μl % 个/μl % 个/μl 参考正常值范围 56%~85% 1027~2086 15%~34% 323~836 30%~54% 706~1125 1~2*
CD4+-和CD8+-T淋巴细胞检测1
