好文档 - 专业文书写作范文服务资料分享网站

CD4+-和CD8+-T淋巴细胞检测1

天下 分享 时间: 加入收藏 我要投稿 点赞

CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测

1 范围

本章规定了用多平台三级程序法和单平台一步法检测全血中的CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞。 2 规范性引用文件

1997 Revised Guidelines for Performing CD4+ T-Cell Determinations in Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus (HIV) MMWR 46(RR-2);1-29 Publication date: 01/10/1997。

3 实验室条件 3.1 人员

进行HIV感染者CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格,并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。

3.2 设施和设备

3.2.1 样品处理区:生物安全柜、离心机、冰箱、水浴箱、旋转振荡器、精确移液器(5μl~50μl、20μl~200μl、200μl~1000μl)。

3.2.2 流式细胞仪检测区:流式细胞仪 3.3 功能分区

实验室原则上应分为样品处理区和流式细胞仪检测区,各区的功能是:

3.3.1 样品处理区应达到生物安全Ⅱ级(BSL-2)实验室要求,用于样品处理、流式检测样品制备。

3.3.2 流式细胞仪检测区用于制备好的样品上机检测。 4 样品采集、运输和接收 4.1 样品的采集

4.1.1 选择合适的抗凝剂,分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测。 (1) EDTA(1.5±0.15mg/ml血液)。

(2)在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测,不超过30h,不检测超出抗凝时间范围的样品。

(1)用K3EDTA抗凝,收集样品应在30h以内,尽早(8h以内)处理。 (2)用ACD或肝素抗凝,收集样品在48h以内,尽早(8h以内)处理。

4.1.2 静脉采血收集血样,将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管(用真空试管)。 4.1.3 准备适当数量的样品管

4.1.4 对所有样品编号,并写明日期和收集时间。 4.2 样品运输

4.2.1 在室温下(18~23℃)保存和运输样品,避免极端温度(冷冻或过热)。超过37℃的温度会破坏细胞,对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天气热时,需要用一个隔热的容器装样品,并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。这种方法有助样品的保存。

4.2.2 尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。

4.2.3 如需运送样品到其它地点时,应将装样品的试管放于一个防漏的容器中,并将此容器放于一个装有充足的吸水性物质的纸罐中,以防止震动并可吸收所有因试管破裂漏出的血液。盖紧纸罐,用橡皮带系紧。

4.2.4 应选择特定的方案,并且安排合适的时间收集和运输样品。 4.3 样品接收

4.3.1 样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。 4.3.2 如有以下现象发生,采取正确的方法处理: 5 方法

目前用于CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞计数的检测方法分为自动检测方法和手工操作法。自动检测方法包括流式细胞仪(主要采用单平台一步法)和专门的细胞计数仪,手工操作法包括几种手工操作试验,需要显微镜或酶联免疫试验设备。

6 实验资料的记录

6.1 实验应及时、准确地记录结果。

6.2 实验记录中应包括以下内容:日期、操作者、所有样品、实验内容、过程(步骤)、结果及有无事故等。

6.3 整个实验室的实验资料要统一有专人负责,按固定格式记录在案。

6.4 计算机生成的实验结果,存档备案;定期拷贝计算机结果文档,备案保存。

7 结果报告

7.1 按照实验结果填写CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测报告单,检测人员签字。

7.2 根据CD命名标准报告数据,用一个简短的描述解释命名的意义。注意:CD4+T细胞是指辅助性T细胞。正确的报告CD4+ T细胞应该是那些CD4+ 和CD3+ 双阳性的细胞。同样地,CD8+ T细胞是T-suppressor/cytotoxic细胞,为CD3+ 和CD8+ 双阳性的细胞。在CD4+ 和CD8+ 的判定中重要的是排除其它细胞(非T细胞)的干扰。

7.3 以全部淋巴细胞的百分比报告数据,并且修正门内淋巴细胞纯度。例如,如果淋巴细胞纯度是94%,而CD3值为70%,可以通过0.7除以0.94乘以100得到74%,修正CD3的值。 7.4 为检测免疫亚群而取血的同时,用该血样作自动测定全血细胞(CBC)计数白细胞(WBC)及分类测定,报告淋巴细胞亚群绝对数值。

7.4.1 用淋巴细胞的总数(来自于WBC及分类)乘以淋巴细胞亚群的百分率(从流式细胞仪的数据中得到),计算绝对数值。

7.4.2 如可能,应报告计数的百分率和绝对值。

7.5 单平台一步法由计算机软件直接出结果并打印出报告单,报告单的内容包括如下结果:CD45+ Abs Cnt;CD3+ Abs Cnt;CD3+ CD4+ %T Lym;CD3+CD4+ Abs Cnt;CD3+CD8+ %T Lym;CD3+CD8+ Abs Cnt;Th/Ts及其正常参考值范围(BD公司建立的正常参考值范围见表3),检测人员签字。

表3 BD公司应用单平台一步法建立的正常参考值范围表 项 目 CD3+/ CD45+ CD3+绝对数 CD3++ CD8+/ CD45+ CD3++ CD8+绝对数 CD3++ CD4+/ CD45+ CD3++ CD4+绝对数 CD4+/ CD8+比值 *另有报告: ①0.68-2.47(中华检验医学杂志,2003,26(2):123-125) ②0.71-2.87(中华检验医学杂志,1998,21(4):223-227)

单 位 % 个/μl % 个/μl % 个/μl 参考正常值范围 56%~85% 1027~2086 15%~34% 323~836 30%~54% 706~1125 1~2*

CD4+-和CD8+-T淋巴细胞检测1

CD4+和CD8+T淋巴细胞检测1范围本章规定了用多平台三级程序法和单平台一步法检测全血中的CD4+和CD8+T淋巴细胞。2规范性引用文件1997RevisedGuidelinesforPerformingCD4+T-CellDeterminationsinPersonsInfectedwithH
推荐度:
点击下载文档文档为doc格式
5vi8m646hh797950lpza3sk4u09qm100fhz
领取福利

微信扫码领取福利

微信扫码分享