产AmpC酶阴沟肠杆菌的检测
杨月琳
【摘 要】近年来，阴沟肠杆菌引起的感染，特别是医院ICU感染的报道越来越多，尤其是产AmpC酶的阴沟肠杆菌已成为引起医院感染流行的典型菌。阴沟肠杆菌产AmpC酶是导致其对新型广谱β-内酰胺酶抗生素产生耐药的重要原因。AmpC酶多数由染色体介导，
【期刊名称】《中国实验诊断学》 【年(卷),期】2008(012)007 【总页数】2页(P933-934)
【关键词】产AmpC酶;阴沟肠杆菌;β-内酰胺酶抗生素;ICU感染;检测;医院感染;染色体介导 【作 者】杨月琳
【作者单位】北京航天总医院,检验科,北京100076 【正文语种】中 文 【中图分类】医药卫生
中国实验诊断学 2008 年 7 月第 12 卷 第 7 期文章编号 ：1007-4287(2008)07-0933-02产 AmpC 酶 阴 沟 肠 杆 菌 的检 测杨 月琳 (北京航天总医院 检验科 ，北京 100076)近年来 ， 阴沟肠 杆 菌 引起 的感染 ， 特别是 医 院ICU 感染的报 道越来越 多 ， 尤其是产 AmpC 酶 的 阴 沟肠杆菌已成为引起医院感染流行的典型菌[1] 。阴沟肠杆菌产 AmpC 酶是导致其对新型广谱 p一 内酰胺 酶抗生素产生
耐药 的重要原 因。 AmpC 酶多数 由染色体介导 ，但近年来陆续发现 了数十种质粒介导 的 AmpC酶 ， 由于质粒介导 AmpC 耐药基因可在 同种或 不同种属细菌间广 泛播散 ， 给 临床 治疗 带来 困难 。 为了解 阴沟肠杆菌 中 AmpC 酶 的分布及耐药性 ， 我 们对从临床感染标本中分离的 161 株 阴沟肠杆菌的 产酶状况进行了研究 。 1 材料与方法1.1 实验菌株 收集2004年 1月至 2005 年 12 月我院临 床 分 离 的 161 株 无 重 复 的 阴 沟 肠 杆 菌。 用 ATB-Expression微生物鉴定仪鉴定到种 。 1.2 标 准 菌 株 产AmpC酶标 准 菌 株 E ． cloacae 029M 、 E ． coliDH5a?919 、E ． cloacae029 由北 京 医 院细 菌室惠赠 。 产 ESBLs 标准菌株 K ． pneumoniaeCF104为本 院药敏实验室保存株 。 1.3培养基 、抗生素纸 片与试验药品 MH 琼脂为 法 国生物梅里 埃 产 品 、 胰酶大 豆 肉汤 为英 国 Oxiod公司产 品。 头孢西 丁 、头孢 曲松 、 亚胺培南 、 头孢吡 肟 、头孢他啶 、 头孢噻肟 、 头孢他啶／ 克拉维酸 、 头孢 噻肟／ 克拉维酸 抗生 素纸 片均 为英 国 Oxiod 公 司产 品。氯唑西林 ( cloxacillin ， CLO ， )为 山西威奇达药业有 限 公 司 生 产 ， 批 号 为 20050702 。三 唑 巴 坦( tazobactam ，TZB) 为海南三 洋德林药业 ） 生 产 ， 批 号为 20050403 。 1.4 产 AmpC 酶菌株初 筛试验采用 K-B(Kirby-Bauer) 纸片扩散法检测试验菌株对头孢西 丁 的敏感性 ，抑菌圈直径 ≤ 17mm ，提示对头孢西 丁耐药或 中介疑为产 AmpC 酶菌株。 1.5 产 AmpC 酶菌株确认试验 1.5.1酶粗提物制备 参照 Coudom 等[2]报道 的反复冻融法制备酶粗提物 。 1.5.2头孢西丁三维试验 将0.5 麦 氏单位标准菌 -933-株大肠埃希菌 ATCC25922 菌液均匀涂布于 MH 琼脂 平皿 ，将头孢西 丁纸 片置 于平皿 中心 。 用 消毒 200 弘l枪头粗 端在 距离头 孢西 丁 纸 片 5mm 处 对 称 打 孔 ，用微量加样器在一孔加酶粗提物 60 肚l， 另一孔 加酶粗提物 50 弘l 及 10fzl20 mmol/L的氯唑西林 ，避免加 入 液 体 溢 出 孔 。 35 ℃ 温 箱 培 养 过 夜 。 以 E ．cloacae 029M 为阳性对照 ， 以 E ． cloacae029 为 阴性对 照 。 1.6Ampc
酶和 ESBLs 的 同时检测参照 吴伟元的改 良三 维试验方法 并作 了部分改进 ，对产 AmpC 酶菌株的酶粗提物进行头孢 曲松三维试验 ，操作方 法基本同上 ，用头孢曲松纸片代替头孢西丁纸片 ，并 切出三个孔 ，分别加入酶粗提物 60 肚l、 酶粗提物 50til+ 20mmol/LCLOl0弘l、酶粗提物 50lil+ 20mmol/L CL0 10 tLl+ 20mmol/LTZB101 上 1。 1.7AmpC 酶表型筛选 参照周志慧等[31的 AmpC酶表型筛选法 ，应用纸片扩散法进行亚胺培南 、头孢 吡肟 、 头孢他啶 、头孢噻肟 、 头孢他啶／ 克拉维酸 、 头 孢噻肟／ 克拉维酸 的抗生素敏感性试验 ，持续高水平 产酶的判定标准为头孢吡肟 、亚胺培南敏感 ，而头孢他啶／ 棒酸 、 头孢噻肟／ 棒酸 、 头孢噻肟耐药 ； 或头孢吡肟 、亚胺培南敏感 ，而在头孢他啶／ 棒酸 、头 孢噻肟／ 棒酸 、 头孢 噻肟 的抑菌 圈 内存在有 散在菌 落。 2 结果 在所检测的 161 株阴沟肠杆菌中，通过产 AmpC酶阴沟肠杆菌初筛试验有 103 株阴沟肠杆菌疑为产酶 的菌株 ， 检 出率为 64.0%(103/161) 。 在所 检测的 103 株阴沟肠杆菌中，三维试验阳性菌株共 46 株 ，总检出率为 42.6% ，结果见 图 1 ，其中单产 AmpC 酶菌株 38 株 ，检 出率为 23.60/0 ， 同时产 AmpC 酶和ESBLs菌株 8 株 ，检出率为 4.9% 。 结果见图 2 。 表型筛选 结果 与三维 实验结果 比较 ：103 株 阴 沟阴沟肠杆 菌从药敏表 型筛选结果分析 ，表现为高 产Ampc酶 的菌株共 52 株 ， 48 株 IPM 、 FEP 表 现 敏感 ，CD02、 CD03 、 CrIX 表现耐药； 4 株 IPM 敏感 ，FEP 、第12卷7期文章编号 ：1007-4287(2008)07-0933-02产酶 阴 沟 肠 杆 菌 的检 测杨月琳近年来 ， 阴沟肠 杆 菌 引起 的感染 ， 特别是 医 院 ICU 感染的报 道越来越 多 ， 尤其是产 AmpC 酶 的 阴沟肠杆菌已成为引起医院感染流行的典型菌[1]。一内酰胺酶抗生素产生耐药 的重要原 因。 AmpC 酶多数 由染酶 ， 由于质粒介导 AmpC 耐药基因可在 同种或不同种属细菌间广 泛播散 ， 给 临床 治疗 带来 困难 。为了解 阴沟肠杆菌 中 AmpC 酶 的分布及耐药性 ， 我们对从临床感染标本中分离的 161 株 阴沟肠杆菌
产AmpC酶阴沟肠杆菌的检测
