高效液相色谱定义、特点、适用范围、分类

高效液相色谱（HPLC）

定义：以液体作为流动相的色谱过程 特点：高压、高效、高灵敏度

适用范围：高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法 类型：

（一）分配色谱 （二）吸附色谱

（三）离子交换色谱法 （四）排阻色谱法 1、分配色谱法

原理：

不同组分在两相间分配系数不同 分类：

液液分配色谱（LLPC） （液体固定相通过物理吸附固定于载体表面） 键合固定相分配色谱（LSPC）（有机物分子通过化学反应键合到载体表面） 固定相：

物理吸附（担体：多孔型担体，薄壳型微珠+固定液） 化学键合

类型：

固定相性质 键合基团 流动相性质 出峰顺序 正相分配色谱 极性（改性硅胶） 极性基团 非极性（正己烷） 极性小先出 反相分配色谱（广泛） 非极性（十八烷基键合硅胶ODS柱） 疏水基团 极性（甲醇，乙腈） 极性大先出 2、吸附色谱法

原理：

溶质与流动相分子在吸附剂表面上的吸附竞争 固定相：

以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。

3、离子交换色谱

原理：

各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 固定相：

固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。 分离对象：

离子或可离解的化合物（无机离子、氨基酸、蛋白质等）

4、排阻色谱法（凝胶色谱法）

原理：

根据样品分子尺寸大小分离（大分子不进孔，随流动相出，小分子进入长时间保留） 固定相：

软凝胶、半硬凝胶、高硬凝胶和玻璃