聚氯乙烯
聚氯乙烯与聚苯乙烯是类似的塑料,也可作
为ELISA固相载体,聚氯乙烯板的特点为质软板薄,可切割,价廉、但光洁度不如聚苯
乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚
苯乙烯高,但空白值有时也略高。
UV分析板(紫外光分析板)
聚苯乙烯和聚氯乙烯板在紫外区有很强的吸收不能
用于蛋白核酸的定量。
nnn
Uv分析板可直接读取核酸及蛋白的浓度在260nm/280nm低本底干扰
UV板价格昂贵一般在150RMB左右
抗原和抗体
抗原和抗体的质量是实验是否成功的关键因素。本法要求所
用抗原纯度高,抗体效价高、亲和力强。
n
天然抗原(天然抗原取材于动物组织或体液、微生物培养物
等,一般含有多种抗原成分,需经纯化,提取出特定的抗原成分后才可应用,因此也称提纯抗原(purifiedantigen)。)
nn
重组抗原合成多肽抗原
(重组抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均为人工合成品,使用安全,而且纯度高,干扰物质少。)
抗体
nn
多克隆抗体单克隆抗体
抗血清成分复杂,应从中提取IgG才可用于包被固相或酶标记。含单克隆
抗体的小鼠腹水中的特异性抗体含量较高,有时可适当稀释后直接进行
包被。制备酶结合物用的抗体的质量往往要求有较高的纯度。经硫酸铵
盐析纯化的IgG可进一步用各种分子筛层析提纯。也可用亲和层析法提纯
特异性IgG,如用酶消化IgG后提取的Fab片段,则效果更好。
包被
固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称
为包
被(coating)。1.抗原或抗体溶于缓冲液(最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液)。2.加于ELISA板孔中在4℃过夜。3.包被后再用1%~5%牛血清白蛋白包被一次,可以消除这种干
扰。这一过程称为封闭(blocking)。(封闭为可选步骤,
有利于降低本底值。)
包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。
4.
ELISA 使用宝典
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