第3章第2节第1课时
第1课时 植物细胞培育技术与单克隆抗体技术
[目的导读] 1.结合教材P53～55图文，掌握哺乳植物细胞培育条件和流程。2.剖析教材P55图3－14，了解植物细胞融合技术。3.单克隆抗体的制备进程。
[重难点击] 1.植物细胞培育条件和流程。2.单克隆抗体的制备进程。
1970年，有两位迷信家做了人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的活动性。思索该如何完成人—鼠细胞的融合，植物细胞融合后还有什么用途呢？植物体细胞杂交可失掉杂种植株，植物细胞融合后能像电影上一样构成杂种植物集体吗？
一、哺乳植物细胞培育技术
1.植物细胞培育条件
(1)培育基形状和成分：液体培育基，成分主要包括葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和植物血清等。
特别提示 植物细胞停止培育时通常要添加植物血清的缘由有两点：一是补充沛解培育基中缺乏的营养物质；二是为植物细胞提供与内环境相似的生活环境。
(2)气体环境：需求足够的氧气和一定的二氧化碳。二氧化碳具有调理培育液pH的作用。 (3)温度和pH：培育温度要与植物体内温度坚持分歧；培育基的适宜pH为7.2～7.4。 2.植物细胞培育流程
(1)取材：取植物的胚胎或幼龄植物的组织或器官剪碎，参与过量胰蛋白酶或胶原纤维酶使细胞分散。
(2)原代培育：经过滤、离心后将植物细胞接种到无菌的培育液中，在适宜的条件下停止运动或慢速转动培育，称为原代培育。
①贴壁生长：悬液的细胞贴附在培育瓶的外表，末尾有丝分裂，其数目以指数增长的方式增多。
②接触抑制：当细胞铺满培育瓶的整个外表后，就构成致密的单层细胞层，此时细胞分裂中止，不再继续生长。
(3)传代培育：贴满瓶壁的细胞需求重新用胰蛋白酶等处置，然后分瓶继续培育，让细胞增殖，即为传代培育。
①细胞生长到10代左右时，出现生长停滞，大局部细胞衰老死亡。
②极少局部细胞可以传到40～50代，遗传物质没有(填〝有〞或〝没有〞)发作改动。 ③有些细胞(如肿瘤细胞)遗传物质发作了改动，可以有限制的传代下去。
结合植物细胞培育的进程剖析以下效果：
1.为什么要取植物的胚胎或幼龄植物的组织或器官细胞停止细胞培育？ 答案 这类细胞具有较强的分裂才干，容易培育。 2.培育进程中两次运用胰蛋白酶，目的有何不同？
答案 第一次是将组织分散成单个细胞，第二次是将贴满瓶壁的细胞分散成单个细胞。 3.能用胃蛋白酶替代胰蛋白酶吗？
答案 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，少数植物细胞培育的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性。
4.植物细胞培育为什么需求无菌、无毒的环境？
答案 离体培育的细胞已失掉了对微生物和有毒物质的进攻才干，一旦遭到污染或自身代谢物质积聚等，培育的细胞就会死亡。 1.以下说法正确的选项是( )
A.植物细胞培育和植物组织培育无任何联络 B.在细胞培育中，有原代培育和传代培育之分 C.原代培育比传代培育停止得晚
D.在对植物成纤维细胞培育时，需用纤维素酶将细胞分散开 答案 B
解析 植物细胞培育和植物组织培育之间相互依存；原代培育和传代培育都属于细胞培育，且传代培育较晚；纤维素酶是分解纤维素的，而植物细胞之间的衔接物质的成分主要为蛋白质，运用胰蛋白酶使细胞分散开。
2.以下有关植物组织培育和植物细胞培育的比拟中，表达错误的选项是( ) A.所用的培育基的成分基本相反
B.植物组织培育的结果是培育成植株，植物细胞培育的结果是培育成很多细胞
C.植物组织培育的目的是为了快速繁衍和取得无病毒的植株，植物细胞培育的目的是为了取得细胞产物或杂交细胞
D.植物组织培育的原理是细胞的全能性，植物细胞培育的原理是细胞的增殖 答案 A
解析 植物细胞培育的培育液中通常含有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，另外还有植物血清等。植物组织培育所用的培育基包括植物生长和发育的全部营养成分，如矿质元素、无机营养成分、植物激素，但没有植物血清。 题后归结 植物细胞培育与植物组织培育的比拟
比拟项目 生物学原理 培育基性质 植物组织培育 植物细胞的全能性 固体 蔗糖、氨基酸、水、矿物质、生长素、细胞分裂素、琼脂等 植物细胞培育 细胞增殖 液体 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、水、植物血清等 培育基成分 培育条件 取材 进程 培育结果 无菌、适宜的温度和pH 植物器官、组织或细胞 脱分化、再分化 植株或组织 植物胚胎、幼龄植物的组织或器官 原代培育、传代培育 细胞或细胞产物 二、植物细胞融合与单克隆抗体技术 1.细胞融合
(1)概念：在一些融合因子的作用下，将两个或两个以上的细胞兼并成为一个细胞的技术。 (2)融合方法
①物理、化学方法：与植物体细胞杂交相反，如聚乙二醇、电流抚慰等。 ②生物方法：灭活的病毒。 2.单克隆抗体
(1)定义：由一个B淋巴细胞增殖构成的细胞群所发生的单一型抗体分子。 (2)制备进程
①取小鼠体内的B淋巴细胞和营养缺陷型的骨髓瘤细胞。 ②用聚乙二醇诱导两种细胞融合。 ③应用选择性培育液挑选出杂交瘤细胞。 ④在新的培育液中少量繁衍。
⑤注射到小鼠体内培育或许在培育液中悬浮培育取得单克隆抗体。 (3)功用
①诊断试剂：快捷、准确地诊断和治疗一些疾病。
②〝生物导弹〞：单克隆抗体携带抗癌药物，专注地杀死肿瘤细胞。 完善单克隆抗体制备进程，思索以下效果： 1.为什么要对小鼠注射抗原？
答案 以取得能发生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞)。
2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合构成杂交瘤细胞？ 答案 每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体，但不能有限增殖；骨髓瘤细胞可少量快
第3章第2节第1课时
