[新题培优练]
1．(2019·咸阳高三模拟)目前我国超过82万人感染艾滋病，预防工作迫在眉睫。科学工作者从HIV感染自愈者体内采集相应免疫细胞，使之与骨髓瘤细胞结合，生产HIV的抗体，具体过程见下图。请回答相关问题：
(1)HIV自愈者免疫细胞是指________________，甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是________________，②过程的目的是筛选具有________________特点的杂交瘤细胞。
(2)HIV病毒主要侵染T淋巴细胞的原因可能是____________________________。
(3)转基因技术被运用到HIV疫苗的研制工作中，该技术操作的关键步骤是________，为使目的基因在受体细胞中正常表达，需要把目的基因片段插入到表达载体的________之间。
(4)用DNA—RNA分子杂交技术确定目的基因是否完成了________(填“转录”或“翻译”)过程。 (5)科学工作者发现一种D蛋白，其31号位的色氨酸替换成酪氨酸后，就能与HIV表面的糖蛋白结合，从而使HIV病毒失去侵染T细胞的能力。制造这种新型蛋白质防治艾滋病，用到的现代生物工程技术是________________。
解析：(1)据图分析可知，HIV自愈者免疫细胞与骨髓瘤细胞融合后可制备单克隆抗体，故HIV自愈者免疫细胞是指能产生抗体的被免疫的B细胞(浆细胞)；用理化因素诱导细胞融合后，要经过多次筛选，先筛选出浆细胞和骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞乙，再进一步筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，故在甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是乙、丙；②过程获得的丙能产生抗体，并能大量培养，故②过程的目的是筛选具有既能无限增殖又能产生特异性抗体特点的杂交瘤细胞。(2)HIV是专一性寄生病毒，T细胞表面有与HIV结合的特异性受体，故HIV主要侵染T淋巴细胞。(3)转基因技术操作的关键步骤是基因表达载体的构建；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动转录出mRNA，终止子是终止转录的，基因的首端要有启动子，尾端有终止子，才能正常表达，故为使目的基因在受体细胞中正常表达，需要把目的基因片段插入到表达载体的启动子和终止子之间。(4)转录过程是以DNA的一条链为模板，合成RNA的过程，故用放射性标记的目的基因的单链DNA片段做探针，与RNA分子杂交，确定目的基因是否完成了转录过程。(5)根据蛋白质的功能，将31号色氨酸替换成酪氨酸后，改造的D蛋白就能与HIV表面的糖蛋白结合，使其失去感染能力，这种技术生产的是自然界中不存在的蛋白质，属于蛋白质工程的范畴。
答案：(1)被免疫的B细胞(或浆细胞) 乙、丙 无限增殖、产生特异性抗体 (2)T细胞表面有与HIV结合的特异性受体 (3)基因表达载体的构建 启动子和终止子
(4)转录 (5)蛋白质工程
2．(2019·辽宁五校协作体高三联考)白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母菌细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素。请据图回答下列问题：
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(1)为增加白细胞介素基因的数量，可使用________技术，但前提是必须知道基因的部分序列，目的是________________________________________________________________。
(2)在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用________处理酵母菌，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为________。在表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。
(3)在体液免疫过程中，白细胞介素是由________细胞分泌的，为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因是__________________
________________________________________________________________________。
(4)在分泌型表达载体和白细胞介素基因所在DNA分子上均有多个限制酶的酶切位点，图示过程获得有效表达的重组载体使用了EcoRⅠ和EcoR 52两种限制酶，与使用单一的限制酶相比，其优点是____________________________________________________________
________________________________________________________________________。 解析：(1)基因工程中，扩增目的基因利用的是PCR技术，但前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，
＋
以便设计引物。(2)在重组载体导入酵母菌细胞之前，需用Ca2处理酵母菌，使酵母菌细胞处于感受态，白细胞介素基因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。在表达过程中，启动子需与RNA聚合酶识别和结合，从而驱动转录过程。(3)在体液免疫过程中，白细胞介素是由T淋巴细胞分泌的；由于细菌属于原核生物，细胞中无内质网和高尔基体等加工白细胞介素的细胞器，因此为了能成功表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞。(4)在分泌型表达载体和白细胞介素基因所在的DNA分子上均有多个限制酶的酶切位点，图示过程获得有效表达的重组载体使用了EcoRⅠ和EcoR 52两种限制酶，与使用单一的限制酶相比，其优点是能防止目的基因、表达载体发生自身环化或者目的基因反向接入分泌型表达载体中。
＋
答案：(1)PCR 设计引物 (2)Ca2 转化 RNA聚合酶 (3)T淋巴 细菌细胞中无内质网和高尔基体等加工白细胞介素的细胞器 (4)能防止目的基因、表达载体发生自身环化或者目的基因反向接入分泌型表达载体中
3．(2019·广东惠州中学高三调研)凡是具有抗原性、接种于机体可产生特异性免疫、可抵抗传染病的发生和流行的物质均可称为疫苗。以下是三代乙肝疫苗的生产原理示意图，请据图回答下列问题：
(1)目前临床使用的乙肝疫苗是第二代疫苗。图中外衣壳蛋白基因A的大量扩增可通过________技术，需要用到的一种重要酶是______________和______________种引物。构建含基因A的重组质粒需要用到的工具酶是
________________________________________________________________________。 (2)据信息和所学知识分析：第一代疫苗基本淘汰的原因是：_______________________。
(3)结合图中第二代、第三代疫苗的化学本质，分析推测哪一代疫苗利于运输及其原因：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
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(4)外源DNA进入机体后，如果整合到人体基因组中可能会引起________和________发生突变而导致机体癌变，这也是第三代疫苗可能存在的安全隐患，目前正在研究中。
解析：(1)目的基因可通过PCR技术大量扩增，该过程需要热稳定DNA聚合酶。由于DNA的结构特点是两条链反向平行，因此扩增过程需要2种引物。构建基因表达载体需要用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶。(2)第一代疫苗用的是减毒或灭活的病毒，病毒有可能恢复致病性或引起血源性疾病。(3)从图中分析，第三代疫苗要比第二代疫苗更有利于运输，因为第三代疫苗本质是DNA，第二代疫苗本质是蛋白质，DNA的稳定性比蛋白质高。(4)细胞癌变的原因是原癌基因和抑癌基因发生突变。
答案：(1)PCR 热稳定DNA聚合酶(或Taq DNA聚合酶) 2 限制酶与DNA连接酶 (2)有引起血源性疾病的嫌疑(或病毒有可能恢复致病性) (3)第三代疫苗更有利于运输，因为第三代疫苗的本质是DNA，第二代疫苗的本质是蛋白质，DNA稳定性比蛋白质高 (4)原癌基因 抑癌基因
4．(2020·高考预测)烟草是有重要经济价值的双子叶植物，易受TMV(烟草花叶病毒)感染导致大幅度减产。绞股蓝细胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV烟草，操作流程如图所示。
(1)①表示遗传信息流动中的________过程，过程③所需要的工具酶是____________。
(2)目的基因大量扩增可以使用PCR技术，该技术包括变性、退火、延伸三个步骤，变性这一步骤的目的是______________________________________________________
________________________________________________________________________。 (3)过程④最常用的方法是__________，过程⑤用到的细胞工程技术是______________。
(4)过程⑥还需要进行基因工程操作步骤中的__________________，在个体水平上检验获得的烟草能否抗TMV的方法是_________________________________________________。
解析：据图分析，①表示逆转录，②表示目的基因的获取，③表示基因表达载体的构建，④表示将目的基因导入受体细胞，⑤表示利用植物组织培养技术获得再生植株，⑥表示目的基因的检测与鉴定。
(1)根据以上分析已知，①表示逆转录过程；③表示基因表达载体的构建过程，需要限制酶和DNA连接酶的参与。
(2)利用PCR技术大量扩增目的基因的过程中，变性的目的是使DNA解链为单链。
(3)④表示将目的基因导入受体细胞，常用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞；⑤表示利用植物组织培养技术获得再生植株的过程。
(4)过程⑥还需要进行目的基因的检测与鉴定，个体水平上检验获得的烟草能否抗TMV的方法是用TMV感染烟草，观察烟草是否被感染。
答案：(1)逆转录 限制酶和DNA连接酶 (2)使DNA解链为单链(DNA解旋) (3)农杆菌转化法 植物组织培养
(4)目的基因的检测与鉴定 用TMV感染烟草，观察烟草是否被感染(患病) 5．(2019·四川绵阳诊断)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。请回答下列问题：
(1)在进行基因工程操作时，需要从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是____________________________________，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是______________________________________。
(2)PCR之前，需要设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，两种引物之间不能存在互补配对序列，原因是___________________________________。
(3)在PCR反应体系中，除具备缓冲液、模板DNA分子和引物外，还应有__________[填序号：①Taq酶 ②dNTP(dCTP、dATP、dGTP和dTTP) ③四种碱基
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2020高考人教版生物大一轮复习练习：第35讲 基因工程 含解析
