昆明景润 食品有限公司 作业指导书 文件号: KJWI-QA-29 版本:A/1 日期:2015-05-25 页数: Page 1 of 5 标题： 总黄酮的测定 文件修改记录 版本 0 A 编写: 杨剑莉 审核: 李昌朋 批准： 伏丽玲 修订修订日期 次数 0 2011-02-14 1 2012-05-25 修订 修 订 内 容 昆明景润 食品有限公司 分发号 : ______(仅适用于控制文件) (仅盖有红色印章的文件才有效) 作业指导书 文件号: KJWI-QA-29 版本:A/1 日期:2015-05-25 页数: Page 2 of 5 标题： 总黄酮的测定 1.0 目的 本标准规定了总黄酮的测定方法。 2.0 适用范围 本标准适用于本草原料及加多宝凉茶半成品、成品中总黄酮含量的测定。 3.0 无 4.0 术语 职责 化验室领班：负责监督检验员按照按此方法进行检测。 化验室检验员：负责按此方法对加多宝凉茶半成品、成品中总黄酮的含量进行检测。 5.0 无 6.0 6.1 工作流程图 内容及要求 原理 溶于乙醇的黄酮类化合物在碱性条件下，与显色剂三价铝离子结合生成有色物质，可在510nm波长附近产生最大吸收。在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，与标准曲线（芦丁标准品）比较，可定量黄酮类化合物的含量。 6.2 仪器 6.2.1 蒸煮锅或灭菌锅 6.2.2 恒温水浴锅 6.2.3 可见分光光度计 编写: 杨剑莉 审核: 李昌朋 批准： 伏丽玲 昆明景润 食品有限公司 6.2.4 液体过滤袋（5μm） 6.2.5 容量瓶50ml 6.2.6 烧杯1000ml 6.2.7 吸管1ml，2ml，5ml，10ml 6.3 试剂 作业指导书 文件号: KJWI-QA-29 版本:A/1 日期:2015-05-25 页数: Page 3 of 5 标题： 总黄酮的测定 除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 6.3.1 30%（V/V）乙醇 6.3.2 5%（M/V）亚硝酸钠 6.3.3 10%（M/V）硝酸铝 6.3.4 1mol/l氢氧化钠 6.3.5 0.2g/l芦丁标准溶液 准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁20mg，加适量30%乙醇溶解（需水浴），并用30%乙醇定容至100ml，即可得浓度为0.2g/l的芦丁标准溶液。 6.4 分析步骤 6.4.1 标准曲线绘制 分别吸取0.2g/l芦丁标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml、8.00ml于50ml容量瓶中，加30%乙醇20ml，5%亚硝酸钠溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6分钟，取出加10%硝酸铝溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6分钟，取出加入1mol/l氢氧化钠溶液10ml，以30%乙醇溶液定容至50ml（V1），暗处放置15min，取溶液于1cm比色皿中，在波长510nm处比色测量其吸光度，以相应的试剂溶液作为空白进行校正。以吸光度为纵坐标，相应的总黄酮浓度为横坐标，制作标准曲线或建立回归方程。 6.4.2 样品处理： 6.4.2.1 本草原料：称取5g（M）样品（金银花、菊花、甘草、布渣叶、夏枯草、蛋花称取编写: 杨剑莉 审核: 李昌朋 批准： 伏丽玲 昆明景润 食品有限公司 作业指导书 文件号: KJWI-QA-29 版本:A/1 日期:2015-05-25 页数: Page 4 of 5 标题： 总黄酮的测定 5g，仙草称取20g）于1000ml烧杯或适宜容器中，用工艺水洗净后加1000ml工艺水在99℃，60min条件下进行浸提，待冷却后用5μm过滤袋过滤并还原至1000ml（V3），收集滤液备用。 6.4.2.2 试样制备：吸取一定量样液V2(加多宝凉茶2ml，6.4.2.1中提取液中仙草1ml、蛋花2ml、夏枯草2ml、金银花2ml、布渣叶5ml、菊花5ml，甘草10ml)于50ml容量瓶中，加30%乙醇20ml，5%亚硝酸钠溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6min，取出加10%硝酸铝溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6min，取出加入1mol/l氢氧化钠溶液10ml，以30%乙醇溶液定容至50ml（V1），暗处放置15min，作为备用液，同时做空白试验（不加10%硝酸铝溶液）。 6.4.3 试样的测定 吸取上述备用液于1cm比色皿中，在波长510nm处比色，以不加10%硝酸铝溶液的试样液作为空白进行校正，于波长510nm处测定吸光度。利用标准曲线，求出备用液中总黄酮的含量m1。 6.4.4 结果计算 本草原料样品中总黄酮的含量按公式（1）计算：X=m1×V1×V3/(M×V2)………………(1) 加多宝凉茶中总黄酮的含量按公式（2）计算：X=m1×V1/V2 ……………………………(2) 式中： X——样品中总黄酮的含量，mg/100g或mg/100ml； m1——由标准曲线计算试样液中的总黄酮含量，mg/100ml； V1——样品定容体积，ml0 V2——样品取样总体积，ml 编写: 杨剑莉 审核: 李昌朋 批准： 伏丽玲 昆明景润 食品有限公司 作业指导书 文件号: KJWI-QA-29 版本:A/1 日期:2015-05-25 页数: Page 5 of 5 标题： 总黄酮的测定 V3——浸提后茶汁还原的体积，ml M——称取样品的重量，g 计算结果保留两位小数。 7.0质量记录 7.1 KJWIF-QA-60 《总黄酮实验方案数据记录表》 7.2 KJWIF-QA-61 《总黄酮测定原始记录表》 编写: 杨剑莉 审核: 李昌朋 批准： 伏丽玲
KJWI-QA-29总黄酮的测定
