第十六章 菌种保存与管理
本章考点： 1.菌种保存方法
2.菌种保管 菌种保管简述、注意事项
一、保存菌种的方法
保存方法 普通琼脂斜面保存法 一般细菌 适用对象 保存条件和时间 4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次 4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球血液琼脂斜面培养基保存法保存法 （最常用而又简易的保存方法） 巧克力色斜面保存法 法 半固体穿刺保存法 干燥保存法 冷冻干燥保存法（目前最有效的菌种保存方法之一） 液氮超低温保存法（目前保存菌种最理想的方法）
二、菌种保管
1.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基。一般原则是使细菌能够生长而不易变异的前提下，必须选择营养丰富的培养基，一般不用含糖的培养基。液体培养基不适于保存菌种。
2.培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存。
但应注意，一般细菌大多保存于4℃冰箱中，但真菌，霍乱弧菌、铜绿假单胞菌及粪产碱杆菌需在室温保存。而脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及初次分离的流感嗜血杆菌需保存于37℃孵箱中。
3.保存菌种应做鉴定记录。在主要培养基上生长情况、菌落特征、形态及革兰染色或特殊染色反应、生化反应、血清学性状以及个别菌种需要的动物试验结果等。 4.保存的菌种应有两套，一套供保存传代用，一套供实验用。 5.定期转种，每转种三代作一次鉴定。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌 链球菌、肺炎链球菌 菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次 35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。 一般4℃冰箱中可保存一个月。 4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月 干燥后低温保存，可保存数年至十几年 冷冻真空干燥，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上 其他方法难以保存 鸡蛋斜面保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌 大多数普通细菌 一般细菌 一般细菌 一般细菌
6.专人保管和发放，严格保管和发放制度。 本章练习题：
目前最有效的菌种保存方法是 A.巧克力斜面保存法 B.鸡蛋斜面保存法 C.半固体穿刺保存法 D.干燥保存法 E.冷冻真空干燥法
将细菌接种于琼脂半固体培养基内，置4℃冰箱保存。保存时间可达几个月 A.1～3个月 B.2～4个月 C.3～6个月 D.1个月 E.3个月
关于菌种保管正确的是
A.应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基 B.培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存 C.保存菌种应做鉴定记录
D.定期转种，每转种三代作一次鉴定 E.专人保管和发放，严格保管和发放制度
[答疑编号500735160103]
第十七章 细菌检验的商品化、自动化设备
本章考点：
（1）微量生化反应系统 （2）自动化装置
第一节 微量生化反应系统
一、常用的微量生化反应系统
根据细菌的不同生物学性状及其代谢产物的差异，可采用多种生化反应系统鉴定细菌，现已有商品化的成套产品，它多由10～24项生化指标组合而成，通过对结果的判定，得出一个3～7位的数据，查阅编码手册即可获得相应的细菌名称。常用的微量生化反应系统有以下几种： （一）Micro-ID系统
本系统主要用于肠杆菌科的细菌鉴定。它是一块带有15个反应池的塑料板，每个反应池含有一种生化 『正确答案』ABCDE
[答疑编号500735160102] 『正确答案』C
[答疑编号500735160101] 『正确答案』E
反应培养基及试剂。
（二）API系统（目前较常用的微量生化鉴定系统）
API系统为一块塑料板，上有20个小杯，每个小杯装有不同的生化反应培养基和指示剂。
API系统 API-20E API-20NE API Staph API Strep API Coryne API 50CHB API NH API Canpy API-20A （三）Minitek系统
该系统为带有l2个凹孔的塑料盘。包括34种生化反应培养基及指示剂的滤纸片。 （四）肠杆菌-MBl2E系统
该系统为一块96个凹孔的塑料板，分8排。可同时鉴定8份标本。每孔含有一种干燥生化培养基，可提供12项生化反应。 （五）氧化发酵鉴定系统
该系统主要有氧化发酵管可应用于非发酵菌，也可用于气单胞菌等一部分发酵型细菌的鉴定。
二、自动化装置
（一）半自动微生物鉴定和药敏系统 1.VITEK—ATB （Automicrobic系统）
（1）原理：将肉眼观察的结果输入电脑，结果与数据库内的细菌条目比较，自动得到鉴定结果。ATB敏感试验采用半固体培养基，不同的药敏试条含有不同种类抗生素。在24小时内通过观察有无细菌生长以判断药敏试验结果。
（2）操作方法：挑取1至数个纯菌落制备为0.5麦氏单位菌悬液，接种试剂条，经35℃孵育18～24小时，观察结果。
2.Microscan Panel使用测试板及快速接种系统，人工判读后将其结果输入电脑，得出结果。 （二）全自动微生物鉴定和药敏系统
1.VITEK系统：该系统可鉴定各种细菌（包括厌氧菌）、酵母菌及细菌的药敏试验。类型有Vitek-32及Vitek-60及VitekⅡ（有两种规格）。
仪器采用数码鉴定原理，每个鉴定卡有30项反应，每3个反应为一组，可得一组10位数的数码。VitekⅡ采用快速荧光法测定细菌。Vitek系统有高级专家系统，对药敏结果进行解释性判读。
2.MicroScan自动微生物分析系统：该系统可鉴定各种细菌（包括厌氧菌）、酵母菌及细菌的药敏试验。类型有WalkAway-40，WalkAway-96。
仪器应用传统呈色反应法，采用快速荧光法测定细菌。药敏部分采用比浊法进行测定。鉴定板有普通和快速两种，后者采用更为敏感的荧光底物，采用酶学方法分析。
第二节 血培养系统
肠杆菌科细菌 非肠杆菌科细菌 葡萄球菌属和微球菌属细菌 链球菌属细菌 棒状杆菌属细菌 芽胞杆菌属等革兰阳性杆菌 奈瑟菌属、布兰汉菌属和嗜血杆菌属细菌 弯曲菌和螺杆菌 厌氧菌 鉴定范围
一、半自动培养仪
BACTECA60系统专用于快检血液、脑脊液、胸水及其他正常无菌体液中的细菌。将待测标本接种于含C-底物的培养瓶中，活菌将利用C-标记底物而产生C02，测定气体量并换算成数值。
培养瓶种类有需氧培养瓶、厌氧培养瓶、L型菌培养瓶、结核菌药敏瓶等。缺点是放射性废弃物的处理较为困难。
二、全自动血培养仪
全自动血培养仪软件功能全，操作简便，具有数据连网共享功能。培养瓶放入仪器后即开始连续孵育、轻度震荡培养和自动检测的全自动过程。
1.BACTEC9000系列：包括9240型（240瓶）、9120型（120瓶）和9050型（50瓶）三种。 BACTEC9000系列利用荧光探测技术（荧光增强法）：全自动连续检测培养瓶内微生物代谢引起的CO2浓度变化，而CO2浓度的改变可直接激活培养瓶底部包埋的对CO2浓度变化高度敏感的荧光物质，在二极管的激发下荧光物质释放荧光，荧光强度变化可直接反应培养瓶内CO2浓度变化。以判定是否有微生物生长繁殖，仪器每十分钟自动进行质控校正，由电脑分析判断细菌培养阴阳性，阳性者发出警报。培养瓶有标准及含树脂（有吸附抗生素作用）的需氧、厌氧瓶、儿童瓶，有真菌培养瓶、分枝杆菌培养瓶。
2.BacT／Alert系统：该系统为一种全自动微生物培养和监测系统，有120瓶和240瓶两种规格。培养瓶种类有需氧培养瓶、厌氧培养瓶、小儿培养瓶和抗生素中和瓶等。
培养瓶底部有特殊的Novel C02感应器，有半渗透性薄膜，将培养基与感应器隔离，只有C02能通过薄膜。当有微生物生长释出C02可渗透至感应器，pH改变使其颜色也改变。仪器每十分种自动检测一次，由电脑分析判断阴阳性。阳性者发出警报。
3.VITAL:有VITAL和mini—VITAL两种规格。培养瓶有需氧和厌氧培养瓶等。仪器采用荧光法（荧光递减）全自动检测，每隔l5分钟读取每一瓶的荧光读数。自动处理数据，当荧光的光度与对应时间的曲线出现明显倾斜时，检出阳性血培养瓶。 本章练习题： A.Micro-ID系统 B.API系统 C.Minitek系统 D.肠杆菌-MB12E系统 E.Automicrobic系统（AMS）
那一项不属于细菌检验微量生化反应系统
[答疑编号500735170101] 『正确答案』E
既可鉴定肠道杆菌又能鉴定厌氧菌的有
[答疑编号500735170102] 『正确答案』B
14
14
14
微生物检验菌种保存与管理
