PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系
陈 果1，2，程玲慧1，刘 波2，周曙光2
【摘 要】摘要：目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白在正常早孕及早期自然流产患者绒毛组织中的差异表达，探讨PPARγ与早期自然流产的关系。方法应用免疫组化PV两步法、Western blot法检测PPARγ蛋白在正常早孕妇女（对照组，n＝40）和早期自然流产患者（实验组，n＝40）绒毛组织中的表达。结果免疫组化显示PPARγ蛋白主要在两组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中表达；Western blot法显示PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达较对照组高，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论PPARγ对妊娠早期滋养细胞浸润起负性调节作用，PPARγ蛋白表达水平增高，可能与自然流产的发生有关。 【期刊名称】安徽医科大学学报 【年(卷),期】2015(000)002 【总页数】3
【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体γ；绒毛组织；早期；自然流产 自然流产是妊娠最常见的疾病，育龄女性发病率为25%～50%［1］。在研究其病因时发现，滋养细胞的侵袭能力下降等一系列生物学行为的异常可能导致流产。因此，深入探讨滋养细胞侵袭力下降的机制可能为自然流产的防治提供新的思路。过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptors，PPARs）是核内受体转录因子超家族成员，具有调节目标基因表达的功能［2］，分为3个亚型：PPARα、PPARβ和PPARγ，其中PPARγ生物学功能最复杂，国内外对其研究也最多。Asami et al［3］在啮齿动物中的实验
数据显示，PPARγ在胎盘发育尤其是滋养细胞侵袭及分化中必不可少，表明PPARγ在妊娠中扮演着重要的角色。然而在人类滋养细胞分化及侵袭能力中的确切作用及影响机制尚未准确阐明。该实验通过免疫组化PV两步法和Western blot法检测PPARγ蛋白在早孕和早期自然流产患者绒毛组织中的表达变化，为研究PPARγ与自然流产的关系提供理论和实验基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1病例资料 选择2012年6月～12月于安徽医科大学妇幼保健临床学院（安徽省合肥市妇幼保健院）妇科门诊就诊的40例早期自然流产患者作为实验组，孕龄6.8～9.8周，年龄20～41（28.2 ±5.2）岁，B超显示无胚芽或无胎心搏动。同期就诊的正常早孕妇女，自愿要求终止妊娠者40例作为对照组，孕龄6.5～9.6周，年龄19～39（28.1± 5.2）岁，B超证实胚胎发育正常。两组研究对象均无妊娠并发症，无不良孕产史，术前1个月未服用激素类药物，签署终止妊娠同意书。经负压吸引流产术获得两组新鲜绒毛组织，无菌条件下剪取一部分组织放于液氮中快速冻存用于提取PPARγ蛋白，剩余另一部分经4%多聚甲醛固定后用于免疫组化。
1.1.2 主要试剂 PPARγ、β-actin抗体（美国Santa Cruz公司）；两步法免疫组化试剂盒、DAB显色剂、山羊抗鼠IgG（北京中杉金桥生物制剂公司）；RIPA蛋白裂解液（北京普里奥基因公司）。 1.2 方法
1.2.1 免疫组化方法 详细阅读抗体说明书，严格控制操作步骤、实验条件，检测两组绒毛组织中PPARγ蛋白表达情况，应用免疫组化PV两步法（抗体稀释
浓度1∶150），各组显微照片的拍摄和冲洗均在相同条件下进行。
1.2.2Western blot法检测 分别定量检测对照组和实验组绒毛组织中PPARγ蛋白表达水平，绒毛组织剪碎后加入RIPA裂解缓冲液1 ml（含10% PMSF），冰上充分裂解，将上清液中的可溶性蛋白转移至PVDF膜上（采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯凝胶电泳方法）。转移后的PVDF膜用抗PPARγ（1∶400）和β-actin（1∶500）行Western blot法检测，实验重复3次。Western blot法进行灰度扫描，用Image-Pro Plus图像处理系统分析光密度值，有效值为特异性条带平均光密度值与面积的乘积，反映蛋白表达水平。
1.3 统计学处理采用SPSS 16.0软件进行分析，数据以±s表示，采用t检验。
2 结果
2.1 实验样本比较观察对照组和实验组年龄、孕龄、孕次、产次等临床特征，结果显示差异无统计学意义。见表1。
2.2 PPARγ绒毛组织中免疫组化分析免疫组化显示PPARγ蛋白在对照组与实验组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中均有表达，且实验组PPARγ染色强度高于对照组。见图1。
2.3 PPARγ蛋白在对照组和实验组绒毛组织中的表达PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达（1.780±0.120）明显高于对照组（1.046±0.200），差异有统计学意义（P＜0.01）。表明PPARγ蛋白可能参与了早期自然流产的病程。见图2。
3 讨论
正常妊娠时，滋养细胞侵入子宫蜕膜的机制虽与恶性肿瘤细胞的侵袭、浸润相似，却受到精确的调控，这一过程的失衡将会导致妊娠相关疾病的发生。滋养细胞浸润能力的下降，无法形成维持正常妊娠时所需的低阻力血管可导致自然
PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系
