目的: 建立微生物限度检查的标准操作规程, 为微生物检验人员
提供正确的操作方法。
范围: 适用于辅料、 内包材料和所有产品的微生物限度检查。 职责: 检验人员对本规程的实施负责。
参照标准: GB/T4789.3- ,GB/T4789.15- ,GB/T4789.2- 内容:
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概述
微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、 辅料受到微生
物污染程度的一种检查方法, 包括染菌量及控制菌的检查。
供试品一般按批号随机抽样; 抽样量应为检验用量( 2个以上最小包装单位) 的3倍量( 以备复检) 。
检验的全过程, 均应严格遵守无菌操作, 严防再污染。
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仪器与用具
恒温恒湿培养箱、 生化培养箱、 恒温水浴、 高压蒸汽消毒锅、
电热恒温干燥箱; 试管、 锥形瓶、 量筒、 培养皿( Φ90mm) 、 刻度吸管、 研钵; 托盘天平或电子天平、 镊子、 剪刀、 酒精灯、 打火机、 编号笔、 75%酒精棉球; 拖鞋、 无菌衣、 裤、 帽、 口罩。
以上玻璃器皿、 镊子、 剪刀等洗净、 晾干, 160～170℃干烤2h, 备用。
所有灭菌物品存放于第一缓冲间, 不应超过2周即用毕。否则, 应重新灭菌。
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培养基、 试液配制
营养琼脂培养基( 细菌用) 、 孟加拉红培养基( 虎红琼脂培
养基, 霉菌用) , 胆盐乳糖培养基( 即BL, 用于大肠杆菌增菌培养) 、 4—甲基伞形酮葡糖苷酸( MUG) 培养基( 用于大肠杆菌快速检查) 、 麦康凯琼脂培养基( 即MacC, 用于肠道菌分离培养) 、 蛋白胨水培养基( 供靛基质试验用) 、 磷酸盐葡萄糖胨水培养基( 供甲基红及VP试验用) 、 枸橼酸盐培养基( 供枸橼酸盐利用试验用) ; 营养肉汤培养基、 四硫磺酸钠亮绿培养基( TTB, 沙门菌增菌用) 、 胆盐硫乳琼脂( DHL) 或沙门、 志贺菌属琼脂( SS) 培养基( 用于沙门菌分离培养) 、 麦康凯琼脂或曙红亚甲蓝琼脂培养基( 大肠杆菌及沙门菌分离培养用) 、 三糖铁琼脂( TSI) 斜面培养基( 肠道菌初步鉴别用) 的配制及灭菌方法参见中国药典 一部附录ⅩⅢC。 0.1%2,3,5-氯化三苯基四氮唑( TTC) 溶液( 供制备培养基用) 、 氢氧化钾试液( 供作V–P反应试剂) 、 α–萘酚乙醇溶液( 供作V―P试剂) 、 靛基质试液。的配制及灭菌方法参见中国药典 一部附录ⅩⅢC。
稀释剂: 0.9%无菌氯化钠溶液、 无菌磷酸盐缓冲液( PH7.2) 。
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操作过程 试验前的准备
将所有已灭菌的培养皿、 锥形瓶、 研钵、 试管、 吸管、 量筒、 稀释剂及供试品等经过传递窗进入无菌室内, 每次试验
4.1 4.1.1
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所用物品必须事先计划, 准备足够用量, 避免操作中出入。将全部包装去掉, 编号。
4.1.2
开启紫外灯30分钟( 或臭氧发生器1h) 和空气过滤装置30分钟, 进行空间灭菌处理。
4.1.3
操作人员用肥皂洗手, 关闭紫外线杀菌灯( 或臭氧发生器) , 进入缓冲间, 换工作鞋。再用0.1%苯扎溴铵( 新洁尔灭) 消毒液洗手或乙醇棉球擦手, 穿戴无菌衣、 帽、 口罩、 手套。
4.1.4
操作前先用乙醇棉球擦手, 再用乙醇棉球( 或碘伏棉球) 擦拭供试品瓶、 盒、 袋等的开口处周围, 待干后用灭菌的手术剪刀将供试品瓶、 盒、 袋启封。启封后先检查包装内侧及周围有无生霉、 长螨迹象, 若经证实为生霉、 长螨即可判为不合格, 无须继续检验。
4.1.5 4.2
定期检查无菌环境的空气是否符合规定。 操作
4.2.1 细菌、 霉菌与酵母菌
4.2.1.1 以无菌操作, 称取检样25g(ml), 加入含225ml灭菌水
的具玻塞锥形瓶中, 振摇30min,即为1: 10稀释液。
4.2.1.2 用灭菌吸管吸取1: 10稀释液10ml, 注入灭菌试管中,
另用1ml灭菌吸管重复吹吸50次, 使霉菌孢子充分散开。
4.2.1.3 取1支1ml灭菌吸管吸取1: 10均匀供试液1ml, 沿管
壁加入装有9ml灭菌稀释剂的试管中, 混匀即1: 100供试液。以此类推, 根据供试品污染程度, 可稀释至1: 10
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微生物限度检查作业指导书样本
