细胞房注意事项和管理
一、 常规操作
１、 穿着专用实验服、自己的白大衣或厚外套,可脱在门外的衣帽架上、 2、 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子,穿着绿色拖鞋进入缓冲间;再在缓冲间换红色拖鞋。尽量幸免在缓冲间走动、停留。
3、 细胞房最多可４个人同时使用、尽量幸免在内长时间逗留、交谈、 4、 离开细胞房前,要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头(离心机、水浴锅、日光灯),超净台开启紫外灯照射２h后关闭。
二、值日生工作职责
1、 每周值日生时间从周一开始,至周日结束、
2。 值日周开始时需做的情况:配制消毒用的75％的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的９５％工业乙醇供酒精灯使用。
* 75%的酒精可用７50ml9５％的酒精加去离子水至９５0ml配制而成。 ３。 值日周内每天需做的情况:开大紫外灯消毒细胞房１5-３０miｎ后才能投入一天的使用,晚上开启紫外灯灭菌,第二天及时关闭;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充;及时安排人员清洗回收培养器皿;检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况;至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋;检查培养箱内水量是否足够、
4、 值日周结束前需完成的情况:星期五全方位打扫细胞房。包括拖地,擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉,擦超净台、冰箱及桌上的仪器,给水浴锅加水或换水,洗细胞房专用的实验服和拖鞋,紫外消毒细胞房、更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换(一个月更换一次)!
5、 每2周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内,关于比较敏感的细胞能够暂存于其他细胞房的培养箱;将培养箱内的不锈钢板取出,包括４块横板和左右２块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,幸免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部１5ｍin,手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净、
20１4。６。9
培养箱使用注意事项
１。 从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。
* 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。
2、 培养瓶皿放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
3。 ２—3人共用一层培养箱,按预定位置摆放培养器皿,方便查找,以免长时间敞开培养箱。普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次,2人以上共用的细胞,可约好时间一起观察。
＊ 频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染,同时也会影响细胞生长条件的恒定。
超净台操作规则
1、 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒,所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。
2。 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够,液面应占瓶高1/３—２/3。 ＊ 消毒用75％的酒精,酒精灯用95％的酒精,向喷壶或灯内添加酒精时请留意、酒精和酒精棉球由值日生负责补给,发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。
３、 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只,用于实验时暂时存放废弃物,实验结束后废液杯内垃圾要随即清理带走,废液杯冲洗、于入室间晾干备用、
4、 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等,放入装有清水的塑料桶中浸泡,桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。
* 可回收器皿初步涮洗后再放入清水内,保证浸泡的瓶、管内完全被清水充满,幸免营养物质在培养瓶或血清管中过多残留而滋生微生物。
回收器皿洗涤程序:洗洁精洗净,清水冲十次以上去除洗涤剂残留;烘干;泡酸缸48h,尽量沥干后取出,清水冲洗10次,纯水冲洗3次,超纯水3次;烘干／晾干;报纸／牛皮纸/锡箔纸包装,高压湿热灭菌１21℃,20mｉn;放入细胞房备用。
显微镜使用注意事项
１、 显微镜使用前,用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2。 离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源,延长灯泡寿命。尽量幸免频繁开关显微镜电源。
培养液、试剂等相关操作规则
1。 从冰箱取放物品动作要迅速,关门时要检查门是否关好、按类别存放试剂。
２、 血清按一定量分装,分装好的血清长时间保存于-２0℃,使用前取出需要的量4℃预解冻。按需解冻,幸免反复冻融。
＊从-20℃取用血清者需在表格上做好登记,方便在不够时及时领取,以免耽搁实验进程。
３。 原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用,若有剩余,则暂存于4℃并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清,以免交叉污染、
细胞冻存记录
细胞名称 实验室 冰箱 层／盒 -80° 液氮 冻存位置 冻存方式 冻存管编号 细胞来源 细胞代数 冻存者 冻存日期 冻存数量
细胞房注意事项和管理
