左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体2A、2B的影响
王宇红1,2,谭小雯2,柴上2,杨蕙3,曾嵘2,孟盼1,张秀丽1,韩远山1
【摘 要】摘要：目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA receptor,NR)2A及NR2B表达的影响,探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,随机分为模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为正常组,每组16只,各给药组给予相应药物灌胃,连续28 d。采用Open-field实验评价大鼠行为变化,ELISA检测海马谷氨酸含量,免疫荧光法检测海马NR2A、NR2B表达。结果与正常组比较,模型组大鼠自主活动次数明显减少(P＜0.01),海马谷氨酸含量明显升高(P＜0.01),NR2A、NR2B表达明显升高(P＜0.01)；与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠自主活动次数明显增加(P＜0.01),海马谷氨酸含量明显下降(P＜0.01), NR2A、NR2B表达降低(P＜0.05)。结论左归降糖解郁方可明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁行为,其药效作用可能与调控大鼠海马谷氨酸含量及NR2A、NR2B表达有关。 【期刊名称】中国中医药信息杂志 【年(卷),期】2015(000)010 【总页数】4
【关键词】左归降糖解郁方；糖尿病；抑郁症；谷氨酸；N-甲基-D-天冬氨酸受体 2A；N-甲基-D-天冬氨酸受体2B；大鼠
【文献来源】https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_chinese-journal-information-traditional-medicine_thesis/0201220145476.html
糖尿病作为全球性的慢性疾病,发病率正迅速上升。预计2035年,糖尿病可影响5.39亿人口[1]。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致一系列慢性并发症,而糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)已成为严重危害人类健康的又一杀手,正在隐匿地侵蚀着患者的身体状况和生活质量。目前,临床上治疗 DD尚无特效药,多采取联合用药模式,但存在一定不良反应。
本课题组前期研究显示,海马是 DD的重要靶器官,左归降糖解郁方可改善 DD的抑郁行为,并对海马损伤起到保护作用[2-3]。另有文献报道,糖尿病患者海马谷氨酸含量明显升高[4],谷氨酸堆积并释放到胞外,可使兴奋性氨基酸受体 N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA receptor,NR)2A、2B亚基水平及受体通道结合位点数目增加,引起海马的神经兴奋性毒性进而导致抑郁的发生[5]。因此,本实验以谷氨酸和关键蛋白NR2A、NR2B的表达为切入点,探讨左归降糖解郁方对DD大鼠海马损伤的保护机制。
1 实验材料
1.1 动物
雄性SPF级SD大鼠96只,鼠龄8周,体质量180～220 g,湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,合格证号 43004700004535；饲养于湖南中医药大学 SPF级实验动物中心。 1.2 药物
左归降糖解郁方由黄芪18 g、贯叶连翘3 g、姜黄9 g、熟地黄15 g、山萸肉12 g、枸杞子12 g、菟丝子9 g、杜仲9 g、丹参12 g、牡丹皮6 g、牛膝9 g组成,湖南中医药大学第一附属医院提供,并制成口服液；盐酸二甲双胍片,湖南湘雅制药有限公司,批号1402115；盐酸氟西汀胶囊,法国Patheon公司提供,
批号2087A。 1.3 试剂
抗大鼠NR2A、NR2B免疫荧光抗体,武汉博士德生物工程有限公司,批号131101W、140512；链脲佐菌素(STZ),美国Sigma公司,批号1126C039；谷氨酸ELISA试剂盒,美国R&D公司,批号201407。 1.4 主要仪器
MK3型酶标仪(美国Thermo公司),Olympus荧光显微镜(日本OLYMPUS公司),DVP-W7显微镜图像处理系统(南京长城信息系统公司),RM223切片机(德国莱卡公司),Open-field敞箱(湖南中医药大学第一附属医院中心实验室)。
2 实验方法
2.1 造模、分组与给药
参照文献[6],利用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射STZ、慢性应激的复合式造模方法建立DD大鼠模型。80只造模大鼠随机分为模型组,阳性药(盐酸二甲双胍0.18 g/kg+盐酸氟西汀1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82、16.41、8.20 g/kg)组(中药高、中、低剂量组)。另取16 只正常SD大鼠作为正常组。各组大鼠造模同时灌胃给药,每日1次,连续28 d,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水。给药体积10 mL/kg。 2.2 观察指标
2.2.1 行为学观察 采用Open-field实验观察大鼠行为学改变。敞箱规格为 80 cm×80 cm×40 cm,25个面积相等的方格构成底面,1 min适应期后,记录大鼠3 min内水平运动格数(四爪皆进入记为1次)、垂直竖立次数(两前爪腾空或攀附箱壁记为1次),以总次数为最后评价指标。每次均从同一角落放入大鼠,测评
左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸及N-甲基-D-天冬
