荷叶提取物的镇静催眠作用
闫明珠1,2，钟 雨1,2，刘新民2，张泽生1，叶林虎2，曹方瑞2，肖冰心2，冯 利2，常 琪2,*
【摘 要】摘要：目的：研究荷叶提取物（乙醇提取物、生物碱、总黄酮和小分子水溶物）对小鼠的镇静催眠作用，筛选其活性组分。方法：利用空场实验、戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验，给予小鼠灌胃荷叶50%乙醇提取物（150、450 mg/kg）和不同分离组分（30、90 mg/kg）后，观察其对小鼠的镇静催眠作用。结果：高剂量荷叶乙醇提取物和低、高剂量荷叶生物碱均能显著抑制小鼠的自主活动，增加阈下剂量戊巴比妥钠引起的小鼠入睡率，缩短戊巴比妥钠阈上剂量的小鼠入睡潜伏期，延长睡眠时间。结论：荷叶乙醇提取物具有显著的镇静催眠作用，生物碱是其主要活性成分。 【期刊名称】食品科学 【年(卷),期】2015(036)005 【总页数】4
【关键词】荷叶；镇静；催眠；生物碱
荷叶为睡莲科多年生水生草本植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的叶片。在2002年3月中国卫生部卫法监发[2002]第51号文件中，荷叶被列入“既是食品又是药品”的名单中[1]。传统医学认为荷叶性苦性平，具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的功效[2]。现代研究表明荷叶具有降脂减肥、抑菌抗病毒、抗炎抗过敏、抗氧化、防衰老等多种生理活性[3]。荷叶中含有生物碱、黄酮、挥发油、鞣质等多种次生代谢产物，其中生物碱和黄酮两类化合物是荷叶中最重要的生物活性和生理功能成分[3]。
黄酮类化合物是荷叶活性物质中含量比较多的一类成分，主要以苷类形式存在，苷元多为槲皮素、山奈酚和杨梅素[4]。荷叶中生物碱类化合物种类繁多，根据母核结构的不同可将其分为3 类：阿朴啡类（荷叶碱、N-去甲荷叶碱、2-羟基-1-甲氧基阿朴啡等）[5-6]、单苄基异喹啉类[7]和去氢阿朴啡类[8]。
本研究利用阳离子交换树脂柱和大孔吸附树脂柱将荷叶乙醇提取物中的生物碱、总黄酮和小分子水溶物3 种组分分离[9-13]，采用空场实验[14]、戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验和延长戊巴比妥钠睡眠时间实验[15]比较醇提物和各组分的镇静催眠活性，从而初步明确其活性组分，为进一步探讨荷叶镇静催眠作用机制提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物
雄性健康ICR小鼠，SPF级，体质量18～20 g，由北京市维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012-0001。动物饲养在恒温（25±2） ℃、恒湿（70%）、12 h明暗交替的SPF级动物房中，自由摄取标准饲料和清洁饮用水。实验前，动物分笼饲养，至少适应实验环境48 h。所有动物均使用一次。 1.2 材料与试剂
荷叶：2012年6月采自湖南，经中国医学科学院药用植物研究所张本刚教授鉴定为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的叶。
地西泮（diazepam，DZP） 中国食品药品检定研究院；戊巴比妥钠 美国Sigma公司；氯化钠注射液 四川科伦药业股份有限公司。 1.3 仪器与设备
RE-52型旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；动物空场实验计算机在线检测系统，由中国医学科学院药用植物研究所和中国航天员中心联合研制。 1.4 方法
1.4.1 荷叶提取物的制备
干燥荷叶300 g剪碎成直径大约为3 cm的碎片，加入9 L的50%乙醇室温浸泡提取3 次，每次24 h。浸泡期间不时搅拌。提取液过滤后合并，于65 ℃减压浓缩至无醇味。将所得浓缩液加入5 倍量的0.1% HCl，搅拌溶解后过滤，滤液经D001阳离子交换树脂柱（200 g）分离，先用不少于1倍树脂量的纯水洗去非生物碱部分后，再以含1%氨的95%乙醇溶液洗脱，将碱性醇洗脱液浓缩蒸干，得生物碱粉末[16]。D001树脂柱的上样流出液和水洗液合并后上样至AB-8大孔吸附树脂柱（300 g），水洗至中性后用70%乙醇洗脱，将乙醇洗脱液浓缩蒸干，得总黄酮粉末[17]。AB-8大孔树脂柱的上样流出液和水洗液浓缩后蒸干，得小分子水溶物部分。各提取物称质量，计算得率。生物碱组分和总黄酮组分分别采用碘化铋钾和三氯化铁试剂进行显色定性鉴别[18]。所有提取物均放置于干燥器中保存。
取适量荷叶乙醇提取物2 份，分别加入0.5%的羧甲基纤维素钠（carboxymethyl cellulose sodium，CMC-Na）溶液配成质量浓度分别为15、45 mg/mL的溶液；荷叶总黄酮、荷叶生物碱和荷叶小分子水溶物均使用0.5%的CMC-Na溶液配制成质量浓度分别为3、9 mg/mL的溶液，以用于不同剂量组的动物实验。
1.4.2 荷叶提取物对小鼠自主活动的影响
120 只小鼠适应性喂养48 h后，随机分为10 组，每组12 只，分别为空白对
荷叶提取物的镇静催眠作用
