多个厂家EGB制剂对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响
徐露 董志 王如伟 黄黎
（重庆医科大学 药学院 重庆市生化与分子药理重点实验室 400016 ）
【摘要】目的 观察七个厂家的七种EGB（银杏叶提取物）制剂对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响。方法 采用体内实验，观察七种EGB制剂对由花生四烯酸（AA）、二磷酸腺苷（ADP）和血小板活化因子（PAF）诱导的家兔血小板聚集作用的影响，以及对给药前后家兔血小板活化因子（PAF）含量的影响。结果 七个厂家的银杏制剂均能抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集，并能够降低血清中PAF的含量。结论 银杏叶提取物制剂具有抗血小板聚集作用，并能显著降低PAF含量，不同厂家的银杏制剂作用强度也存在差异性，可能与其银杏内酯含量不同有关，为临床治疗缺血性心脑血管疾病提供了参考。
EGB（银杏叶提取物）制剂是由银杏叶提取得到的，它是一种用途广泛、无不良反应的天然物质。EGB的活性成分主要有黄酮类、萜内酯类、酚酸类化合物和微量元素等，其中银杏内酯占2.8%～3.4%，具有抗炎和保护神经作用。 1. 材料与方法 1.1仪器与试剂
日本大耳白兔，体重2.0±0.2kg，雌雄各半，由重庆医科大学实验动物中心提供；银杏叶提取物制剂（浙江康恩贝A、江苏某药企业、上海某药企A、上海某药企B、湖南某药企、贵州某药企、浙江某药企B）；AA（sigma）使用时将其溶解在1%碳酸钠溶液中，配成0. 35mmol/L的浓度；ADP（sigma）溶于磷酸盐缓冲液,最终浓度为300μmol/L；PAF（cayman）溶解在PH为7.6的含0.25%小牛血清蛋白的Tris-NaCl溶液中，终浓度为3.6nmol/L；枸橼酸钠（北京中杉金桥生物技术公司）蒸馏水配成3.8%的浓度；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪（上海通用技术研究所研制）；兔血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒（Uscnlife）；酶标仪（spectra maxm2多功能酶标仪）。 1.2方法
1.2.1分组及给药方法
日本大耳白兔56只，随机分为8组，每组7只：生理盐水组、浙江康恩贝组、江苏某药企业组、上海某药企A组、上海某药企B组、湖南某药企组、贵州某药企组、浙江某药企B组。以上各组EGB剂量均根据文献[1]由人体剂量换算为家兔等效剂量，ig给药，每日三次，连续7d。
1.2.2检测血小板聚集率及PAF含量
每只动物首次给药前，耳缘静脉抽血1ml，室温放置2h取血清，检测给药前PAF含量。在第7d给药后1h，心脏取血7ml，分出1ml用于检测给药后PAF的含量，剩余6ml用3.8%枸橼酸钠1：9抗凝，800r/min离心10min，取上清得富血小板血浆（PRP），剩余部分3000r/min速度离心15min，取贫血小板血浆（PPP）。用PPP调节PRP，使PRP血小板数目在360×109/L。测定并记录在不同诱导剂下1min、5min及最大血小板聚集率。
血小板聚集率（%）=（对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率）/对照组血小板聚集率×100
1.2.3统计方法
血小板聚集率检测用生理盐水组与给药组比较，采用成组t检验；PAF含量检测采用给药前后自身对照，用配对t检验。 2.2结果
2.2.1家兔血小板聚集率的检测结果
检测结果表明，和对照组相比七个药厂有五种EGB制剂均能抑制AA、ADP诱导的家兔血小板聚集，而江苏某药企和上海某药企A对此无显著意义。七种EGB制剂均对PAF诱导的血小板聚集有明显作用。其中杭州某药业A组抑制PAF诱导的血小板聚集作用更显著。（见表1-3）
表一 AA诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)
组别 给药剂量 mg/kg 生理盐水组 浙江康恩贝 江苏某药企 上海某药企A 上海某药企B 湖南某药企 贵州某药企 浙江某药企B 等容积 20.53 20.53 26.68 20.53 12.83 20.53 16.17 3 3 3 3 3 3 3 3 30.12±5.24 29.50±5.63 给药次数（次/d） 1min 给药后聚集率（%） 血小板聚集5min Max 抑制率(%) 54.15±7.56 40.66±6.53** 55.69±9.84 42.80±7.13* 23.15 30.11±5.81 29.48±5.48 30.83±5.53 30.76±5.66 28.35±5.42 29.58±5.47 41.74±6.67** 42.52±6.83* 41.28±7.46** 42.15±7.91* 41.23±7.52** 40.50±7.16** 46.52±7.97 45.85±7.39 43.60±8.01* 42.81±7.43* 43.33±7.59* 42.96±7.31* 16.47 17.67 21.71 23.13 22.19 22.86
表二 ADP诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)
组别 给药剂量 mg/kg 生理盐水组 浙江康恩贝 江苏某药企 上海某药企A 上海某药企B 湖南某药企 贵州某药企 浙江某药企B 等容积 20.53 20.53 26.68 20.53 12.83 20.53 16.17 3 3 3 3 3 3 3 3 32.56±5.52 30.88±5.57 31.65±5.43 31.81±5.83 30.47±5.13 30.37±5.03 31.09±5.52 30.63±5.88 52.16±8.90 36.47±5.76** 45.95±7.92 44.23±6.79 44.82±7.51 42.83±7.36 43.06±7.98 43.25±8.07 56.03±9.74 42.90±6.91* 46.11±8.24 45.96±8.67 45.06±8.13* 44.42±7.62* 43.97±8.24* 44.69±7.31* 给药次数（次/d） 1min 给药后聚集率（%） 5min Max 血小板聚集抑制率(%) 23.43 17.70 17.97 19.58 20.72 21.52 20.24 表三 PAF诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)
组别 给药剂量 mg/kg 生理盐水组 浙江康恩贝 江苏某药企 上海某药企A 上海某药企B 湖南某药企 贵州某药企 浙江某药企B
2.2.2家兔PAF含量检测结果
检测结果表明七种EGB制剂均能降低家兔血清中的PAF含量。（见表4）
表四 PAF含量检测结果（x±s,n=7)
等容积 20.53 20.53 26.68 20.53 12.83 20.53 16.17 3 3 3 3 3 3 3 3 29.85±5.33 23.23±4.53* 23.12±4.24* 23.15±5.31* 22.24±5.47* 23.01±5.76* 22.83±5.54* 23.50±5.79* 49.15±7.54 34.04±5.36** 37.67±6.48** 37.56±6.68** 37.16±6.23** 36.53±6.61* 35.96±6.21** 37.41±6.12** 56.77±10.23 34.67±5.67** 39.23±6.35** 37.94±7.11** 39.57±6.52** 38.64±6.30** 37.95±6.44** 38.63±6.68** 给药次数（次/d） 1min 给药后聚集率（%） 5min Max 血小板聚集抑制率(%) 38.93 30.90 33.17 30.30 31.94 33.15 31.95
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