货号：MS1500 规格：100管/96样
超氧化物歧化酶试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。
自备实验用品及仪器：
分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
产品内容：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：5 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存，用时加12mL双蒸水，充分混匀，现配现用。 试剂三：液体200μl×1支，4℃保存； 试剂四：液体4mL×1瓶，4℃保存； 操作步骤：
一、样品的前处理：
(1) 细菌、细胞或组织样品的制备：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率20%或200w。超声3秒，间隔10秒。重复30次）。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆； 8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
(2) 血清(浆)样品：直接检测 二、测定操作表： 试剂一（μL） 试剂二（μL） 试剂三（μL）
测定管 45 100 2 第1页，共2页
对照管 45 100 2
样品（μL） 试剂四（μL） 双蒸水（μL） 18 35 35 18 充分混匀，室温静置30min后，560nm处测定各管吸光值A。
注意事项：
1，测定前将试剂一、二和四室温放置，使试剂的温度不低于室温后再测定。 2，试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。 3，对照管只需要做一管。
SOD活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝( A 对照管－A 测定管) ÷A 对照管 × 100%
尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD活性（U/ml）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷V样×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ×样本稀释倍数
（2）组织、细菌或培养细胞SOD活力计算： a，按样本蛋白浓度计算
SOD活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(V样×Cpr)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷Cpr×样本稀释倍数。
b，按样本鲜重计算
SOD活性（U/g 鲜重） =[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(W×V样÷V样总)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷W×样本稀释倍数。
c，按细菌或细胞个数计算
SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V反总] ÷(500×V样÷V样总)×样本稀释倍数=0.022×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×样本稀释倍数。
V反总：反应总体积，0.2ml；V样：加入反应体系中的样品体积，0.018ml；V样总：加入提取液体积1ml；Cpr：蛋白样本浓度，mg/ml; W:样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500万。
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超氧化物歧化酶试剂盒说明书
