榅桲总黄酮对血栓形成和血小板聚集作用的影响
轻曼古丽·阿吉1，2， 马 虎1， 美合热阿依·伊萨克1， 周文婷1， 依丽孜拉·阿不都沙拉木1，
【摘 要】摘要：目的研究榅桲总黄酮对大鼠血栓形成及血小板聚集功能的影响。方法采用胶原蛋白-肾上腺素混合物诱导小鼠肺血栓模型、大鼠动-静脉旁路血栓形成模型、体外对凝血酶诱导的兔血小板聚集作用的影响，观察榅桲总黄酮的抗血栓形成作用。结果榅桲总黄酮能明显提高胶原蛋白-肾上腺素混合物诱导小鼠的存活率；榅桲总黄酮能明显减轻动-静脉旁路血栓湿质量，降低血浆中血栓素B2（TXB2）的水平和增加血浆中6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的水平；可抑制不同时间点由凝血酶诱导剂诱导的家兔血小板聚集。结论榅桲总黄酮有抗血栓形成作用，并具有抗凝血酶诱导血小板聚集作用。 【期刊名称】中成药
【年(卷),期】2015(037)007 【总页数】4
【关键词】榅桲总黄酮；血小板聚集；动-静脉旁路血栓模型；血栓素B2；6-酮前列腺素-F1α
榅桲为蔷薇科榅桲属植物榅桲Cydonia oblonga Mill.的成熟果实。榅桲呈梨形，外皮黄棕色或暗红色，皱缩不平，肉厚而粗，切面呈小颗粒状，边缘不卷曲。气芳香，味酸甜［1］。其成熟果实可补脑益心，增益精神力，助胃利水，止渴止咳，用于头晕心慌，神疲乏力，食少胃弱，泻痢咳喘，咯血呕恶，口渴尿闭。
目前对榅桲的化学成分研究较多见，而药理作用只见榅桲提取物具有明显的抑
制动脉血栓形成，抗凝血和纤溶作用［2］和降血压、调血脂［3］方面的研究。本实验在前期研究的基础上，进一步研究榅桲总黄酮抗血栓形成作用。
1 材料
1.1 榅桲果实总黄酮和榅桲叶总黄酮制备［4］榅桲果实和叶采自新疆叶城县，置于阴凉通风干燥处干燥，榅桲由新疆医科大学药学院天然药物学/生药学教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为蔷薇科榅桲属植物Cydonia oblonga Mill.的叶和果实。被粉碎成粉末后，用30倍60%乙醇在60℃超声提取3次，每次40 min，合并滤液，用旋转蒸发仪回收乙醇得到榅桲总黄酮浸膏备用。榅桲总黄酮浸膏用大孔树脂进一步富集纯化，得到榅桲总黄酮，按芦丁计算榅桲总黄酮含有量均大于60%。
1.2 动物 小白鼠，雌雄各半，128只，体质量18～22 g，清洁级；均由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（新）2011-0004；SD大鼠，雌雄各半，64只，体质量300～350 g，清洁级；均由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（新）2011-0004。
1.3 试剂 阿司匹林（Sigma-Aldrich Chimie Sarl公司，批号081M0194V），乌拉坦 （上海三浦化工有限公司，批号20060418），血栓素B2放射免疫分析药盒 （北京北方生物研究所，批号130620），6-酮-前列腺素放射免疫分析药盒（北京北方生物研究所，批号130620），凝血酶 Sigma-Aldrich公司产品。 1.4 仪器 490-4D型血小板聚集仪（美国CHRONO-LOG公司），BC-2300准全自动三分群血液细胞分析仪 （深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司），GC-2016γ放射免疫计数器 （安徽中科中佳科学仪器有限公司），RE-52AA旋转蒸发仪 （上海亚荣生化仪器厂），SH8210HP超声仪 （上海科导仪器厂），
BL1500电子天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司），TDL-5A离心机 （上海菲恰尔分析仪器有限公司），分析天平 （梅特勒托利多仪器厂）。
2 实验方法
2.1 榅桲总黄酮对凝血酶诱导的家兔血小板聚集的影响
2.1.1 富血小板血浆（platelet rich plasma，PRP）和贫血小板血浆（platelet poor plasma，PPP）的制备［5-6］自清醒家兔颈动脉取血，以3.8%枸橼酸钠 （9∶1）抗凝收集于离心管中，在室温条件下，1 000 r/min离心10 min，上层液即为PRP。剩余血液再以3 000 r/min离心15 min，上层液即为PPP，作为测定时调零或用于调整PRP中的血小板数。PRP呈乳白色，PPP呈清亮透明的淡黄色。本实验血小板数控制在2.0×1011个/L（做预实验得到的）。 2.1.2 血小板聚集性测定 按Born氏比浊法原理采用血小板聚集仪进行测定。分别取PPP及PRP各270μL于比浊管中，置于预热孔；于PRP管中加溶媒或药液30μL，37℃恒温温育5 min。测定时用PPP管调幅至100%，再用PRP管调零；如此反复数次至稳定。然后在磁棒搅拌下在PRP中加入诱导剂，凝血酶 （10 U/mL），并记录血小板聚集率。
2.2 榅桲总黄酮对胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠肺血栓形成的影响 小鼠128只，体质量18～23 g，雌雄各半，随机分8组，分为生理盐水对照组，榅桲叶总黄酮小、中、高剂量组 （60、120、240 mg/kg）组，榅桲果实总黄酮小、中、高剂量组 （60、120、240 mg/kg）组，阿司匹林组（15 mg/kg），连续灌胃给药14 d，参照文献［7］的试验方法，称取胶原蛋白30 mg，用生理盐水浸泡2 h以上，另取浓度为1 mg/2 mL的盐酸肾上腺素2 mL加入上述溶液中，混匀，加生理盐水至25 mL即可。于末次给药后30 min尾静脉注射胶原蛋白
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