illumina基因测序仪中文测序原理 - 图文 

Sequencing Technology

张军磊

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南京才泰生物科技有限公司

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测序流程

1文库制备(~ 6 hrs)片段化的DNA末端修饰/ 添加一个A两端加接头选择加上接头的DNA扩增达到合适上样量2自动簇生成(~ 5 hrs)

1-8 个样品

杂交到flow cell表面延伸oligo接头

完成桥式扩

在模板序列链上加测序引物

3测序(~ 36 hrs for 36 循环)

1-8 样品

对模板序列链执行测序

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2文库制备流程

纯化基因组DNA

使DNA片段化片段< 800 bp

DNA 片段

通过填充和核酸外切酶作用使末端补平磷酸化作用

末端修饰末端补平，在5’加上一个磷酸基团

加上一个“A”到3’端3’–小突出

添加一个A碱基连上接头

在末端加上接头加上接头的DNA片段

片段大小选择300 –600 bp 片段

PCR扩增扩增带接头的DNA

文库质控基因组DNA文库制备完成

3COMPANY CONFIDENTIAL –INTERNAL USE ONLY

测序流程

1Library prep (~ 6 hrs)DNA片段末端修饰/ 添加一个ADNA片段两端加接头选择加上接头的DNA片度2Automated Cluster Generation (~ 5 hrs)

1-8个样品

杂交到flow cell表面延伸杂交的oligo短序列

进行桥式扩增

3Sequencing (~ 46 hrs for 36 cycles)

1-8个样品

对forward strand执行测序

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4流动槽（Flow cell）8 个通道简易流程中的关键点

Flow cell 表面结合一层oligo接头。纯净的簇是在一个独立的环境中生成的（需要一个洁净的室）

测序步骤也在flow cell 的簇上进行

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