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薄荷油与薄荷醇促进中药成分经皮吸收
的对比讨论
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薄荷为唇形科多年生草本植物薄荷Menthahaplocalyx Briq. 的茎叶，在中药外用制剂中应用广泛，多利用其“芳香走窜”特性而发挥“率领群药、直达病所”之功，具有类似现代经皮促透剂的作用。薄荷的有效部位主要为其挥发油成分，因此，薄荷油作为促透剂成为目前研究的热点，文献研究也显示，薄荷油作为促透剂可促进某些成分的经皮吸收，如L-肉碱、左旋延胡索乙素等。其中，薄荷醇是薄荷油中含量最高的一种成分，一般约占50% 以上，文献研究显示，薄荷醇作为促透剂也具有良好的经皮促透效果。 但是，薄荷油与薄荷醇的经皮促透研究多集中在对某单一成分的促透评价，对中药复杂成分的经皮促透特征目前尚不清楚，同时，薄荷醇作为薄荷油中最主要成分，是否可用成分单一的薄荷醇代替组成复杂的薄荷油用于中药外用制剂的经皮促透，有待进一步研究。因此，本文基于现代经皮定量结构-渗透性关系( quantitative structure-permeation relationships，QSPRs)
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研究结果，即药物理化性质中logP( 油水分配系统) 是影响药物经皮吸收最主要的影响因素。因此，选择系统不同logP 有效成分简化并表征复杂中药成分体系，即蛇床子素( osthole，OT， logP = 3. 85) 、川芎嗪( tetramethylpyrazine，TMP， logP = 2. 34) 、阿魏酸( ferulic acid，FA， logP =1. 26) 、葛根素( puerarin，PR， logP = - 0. 35) 、京尼平苷( geniposide，GP， logP = - 1. 01) ，通过测定其经皮促透作用情况，对比探讨薄荷油与薄荷醇的经皮促透作用特征。同时，采用傅利叶变换红外光谱技术( FTIR) 进一步比较薄荷油与薄荷醇对角质层内在分子结构的影响，从而为其在中药外用制剂中的合理应用提供科学指导。 1 材料
TK-20B 型透皮扩散试验仪( 上海锴凯科技贸易有限公司) ; 岛津高效液相色谱系统( 包括LC-20AT泵、SPD-20A 紫外检测器，日本岛津公司) ; Nexus 型全反射傅利叶变换红外光谱仪( ATR-FTIR，美国Thermo-Nicolet 公司) ; Sartorius BS 110 型电子分析天平( 北京赛多利斯科学仪器有限公司) ; CP-7800型电动递毛器( 科德士电器有限公司) 。薄荷药材购于北京本草方源药业有限公司，批号20131007，产地江苏，经北京中医药大学中药炮制系谭鹏副教授鉴定为
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唇形科植物薄荷M. haplocalyx的干燥地上部分，符合《中国药典》( 2010 年版) 相应项标准。薄荷油采用2010 年版《中国药典》附录挥发油提取甲法提取，得淡黄色油状液体，无水硫酸钠脱水后避光密闭保存。GC-MS 测定其主要成分为薄荷醇( menthol，51. 00%) 、薄荷酮( menthone， 6. 11%) 、瓜菊醇酮( cinerolone，3. 19%) 、优香芹酮( eucarvone，2. 58%) 、胡椒酮( piperitone， 2. 19%) 、异薄荷酮( isomenthone，1. 99%) 、长叶薄荷酮( pulegone，1. 32%) 等[8]。薄荷醇、阿魏酸( 纯度> 98. 00%) 均购于国药集团化学试剂有限公司，批号分别为F20110811，20120328; 川芎嗪购于Sigma-Aldrich 公司，批号为14003DEV; 蛇床子素、葛根素、京尼平苷均购于NCEBiomedical 公司，纯度均> 98. 00%，批号分别为20131209， 20131209， 20131209; 苄泽98( Brij 98) 购于Sigma-Aldrich 公司，批号为MKBP0994V; 丙二醇购于Sigma-Aldrich 公司，批号为WXBB1075V; 冰醋酸购于北京化工厂，批号为20080103; 乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。健康雄性SD 大鼠，5 周龄，体重约( 200 ± 10)g，由斯贝福( 北京) 实验动物科技有限公司提供，合格证号SCXK( 京) 2011-004。 2 方法
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2. 1 模型药物HPLC 法的建立
分别配制各模型药物对照品的对照液、体外透皮试验空白接收液及含药体外透皮试验接收液，考查各方法专属性、线性关系、精密度及相对回收率，见表1。结果显示，接受液中其他成分对各模型药物的测定均无干扰，其中，蛇床子素在0. 01 ～ 100mg·L - 1 线性关系良好，低、中、高3 个质量浓度( 0. 1，10，50 mg · L - 1 ) 的日内精密度分别为0. 29%，0. 060%，0. 14%，日间精密度分别为1. 8%，0. 13%，0. 19%，相对回收率分别为95. 63%，100. 6%，100. 1%; 川芎嗪在0. 1 ～ 400 mg·L - 1 线性关系良好，低、中、高3 个质量浓度( 1，20， 200 mg·L - 1 ) 的日内精密度分别为0. 35%，0. 12%， 0. 20%，日间精密度分别为2. 4%，2. 5%，2. 7%，相对回收率分别为95. 59%，95. 80%，97. 61%; 阿魏酸在0. 1 ～ 200 mg·L - 1 线性关系良好，低、中、高3 个质量浓度( 1， 20， 100 mg·L - 1 ) 的日内精密度分别为0. 38%， 0. 21%，0. 25%，日间精密度分别为1. 8%，0. 15%，0. 14%，相对回收率分别为91. 72%，90. 74%，95. 24%; 葛根素在0. 1 ～400 mg·L - 1线性关系良好，低、中、高3 个质量浓度( 1， 20， 200 mg·L - 1 ) 的日内精密度分别为0. 48%，0. 32%，0. 26%，日间精密度分别为0. 22%，
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0. 070%，0. 050%，相对回收率分别为97. 48%，97. 74%， 99. 27%; 京尼平苷在0. 1 ～ 400 mg·L - 1线性关系良好，低、中、高3 个质量浓度( 1，20，200mg·L - 1 ) 的日内精密度分别为0. 79%，0. 72%，1. 2%，日间精密度分别为1. 7%，2. 3%，1. 2%，相对回收率分别为96. 41%，97. 84%，99. 59%。2. 2 体外经皮渗透试验
2. 2. 1 离体鼠皮的制备
在体外经皮渗透实验前，取雄性SD 大鼠断颈处死，用剃毛器小心剃去腹部鼠毛后剥离其腹部皮肤，在玻璃板上小心剔除皮下脂肪组织和黏连物，然后用磷酸缓冲液( PBS) 清洗干净，待用。 2. 2. 2 供给液的制备
为求算薄荷醇和薄荷油的经皮透渗稳态流速、滞后时间，采用无限给药技术进行体外透皮实验。故供给池中药液的配制方法为:将足量的模型药物分别溶于丙二醇-水( 80∶ 20) 混合溶剂系统中，加入相应浓度薄荷醇或薄荷油，涡旋5min，超声15 min 使其充分溶解。
2. 2. 3 体外透皮试验
将剥离的大鼠腹皮固定于FranZ 扩散池之间( 扩散池有效扩散面积为1. 77cm2，接收池体积为7 mL) ，
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薄荷油与薄荷醇促进中药成分经皮吸收的对比讨论
