第八章 分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学
测 试 题
一、名词解释 1．分子杂交
2．Southern blotting 3．Northern blotting 4．Western blotting 5．dot blotting 6．DNA芯片技术 7．PCR
8．功能性克隆 9．转基因技术
二、填空题 1．Southern blotting用于研究 、Northern blotting用于研究 ，Western blotting用于研究 。
2．PCR的基本反应步骤包括 、 和 三步。
3. 在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入 、 、 和 。 4．Sange法测序的基本步骤包括 、 、 和 。 5．目前克隆致病相关基因的主要策略有 、 、 。
6．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是 ，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是 。
三、选择题 A型题
1. 经电泳分离后将RNA转移到硝酸纤维素(NC)膜上的技术是： A．Southern blotting B．Northern blotting C．Western blotting D．dot blotting E．in situ hybridization
2. 不经电泳分离直接将样品点在NC膜上的技术是
A．Southern blotting B．Northern blotting C．Western blotting D．Dot blotting E．in situ hybridization
3. 经电泳分离后将蛋白质转移到NC膜上的技术是
A．Southern blotting B.Northern blotting C．Western blotting D．dot blotting E．in situ hybridization
4. 经电泳后将DNA转移至NC膜上的技术是
A．Southern blotting B．Northern blotting C．Western blotting D．Eastern blotting E．in situ hybridization 5. PCR的特点不包括
A．时间短，只需数小时 B．扩增产物量大 C. 只需微量模板 D．用途非常广泛 E. 底物必须标记
6．用于PCR的DNA聚合酶必须
A．耐热 B．耐高压 C. 耐酸 D．耐碱 E. 耐低温 7．PCR反应过程中，模板DNA变性所需温度一般是
A．95 °C B．85 °C C．75 °C D．65 °C E．55 °C 8．PCR反应过程中，退火温度一般是
A．72 °C B．85 °C C．75 °C D．65 °C E．55 °C 9. PCR反应过程中，引物延伸所需温度一般是
A．95 °C B. 82 °C C．72 °C D．62 °C E．55 °C 10．PCR反应体系不包括
A. 模板DNA B．TaqDNA聚合酶 C. 上、下游特异性引物A、B D．ddNTP
2+
E．含Mg的缓冲液
11．PCR的循环次数一般为
A．5～10次 B．10～15次 C．15～20次 D．20～25次 E．25～30次
12．PCR反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺少 A．模板 B．引物 C. DNA聚合酶 D．ddNTP E．缓冲液 13．Sanger法测序不需要
A．Klenow小片段 B．引物 C. dNTP D．标记dNTP E．ddNTP 14．Sanger法测序的基本步骤不包括
A．标记模板 B．模板一引物杂交 C．电泳 D．引物的延长与合成阻断 E．放射自显影直读图 15．Sanger法测序的四个反应体系中应分别加入不同的
A．模板 B．引物 C标记dNTP D．DNA聚合酶 E. ddNTP
16．人类基因组计划的主要研究内容不包括
A．遗传图分析 B．物理图分析 C．转录图分析 D. 序列图分析 E．蛋白质功能分析
17．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是 A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术 D．肽核酸技术 E. 反义核酸技术
18．Maxam—Gilbert法与Sanger法测序的共同点是均需 A. 引物 B．Klenow大片段 C. ddNTP D. 化学裂解试剂 E．电泳后放射自显影读图
19．Sanger法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列为 A．待测DNA5￠到3￠的碱基序列 B．待测DNA3￠到5￠的碱基序列
C．待测DNA互补链3￠到5￠的碱基序列 D．待测DNA互补链5￠到3￠的碱基序列 E．引物5￠到3￠的碱基序列 20．PCR实验的特异性主要取决于：
A．DNA聚合酶的种类 B. 反应体系中模板DNA的量 C．引物序列的结沟和长度 D．四种dNTP的浓度 E. 循环周期的次数
21．基因剔除(knock out)的方法主要被用来研究
A．基因的结构 B．基因的功能 C. 基因的表达 D．基因的调控 E．基因的突变 22. 反义核酸作用主要是
A．封闭DNA B．封闭RNA C．降解DNA D．降解DNA E．封闭核糖体的功能 23．有关Sanger法测序的叙述，不正确的是 A．只需标记一种dNTP
B. 一般应去除DNA聚合酶I的5￠到3￠外切酶活性 C．与dNTP相比阻断剂应尽可能的多
D．反应时间不必太长 E. 应采用超薄高压电泳 B型题 (1—5)
A．Northern blotting B．dot blotting C．Western blotting D. Southern blotting E. in situ hybridizanon
1.．用限制性内切酶酶切后进行电泳分离，再将DNA转移到NC膜上杂交的技术是 2．电泳分离后将RNA转移至NC膜上杂交的技术是
3．电泳分离后将蛋白质转移至NC膜上，与标记蛋白杂交的技术是 4．不经电泳直接将样品点在NC膜上杂交的技术是 5. 在组织切片上直接与探针杂交的技术是 (6—8)
A．95°C B．85 °C C．72°C D．65°C E．55°C 6．PCR变性温度一般是 7．PCR退火温度一般是 8．PCR引物延伸温度一般是 (9—12)
A．Taq DNA聚合酶 B. 反转录酶 C．K1cnow大片段 D．末端核苷酸转移酶 E．Klenow小片段 9．同聚物加尾连接需要 10．PCR需要
11．Sanger法测序需要 12．由mRNA合成cDNA需要
X型题
1.PCR反应体系中含有
A．特异性引物 B．Klenow大片段 C.dNTP
35
D．ddNTP E．S-a-dATP 2. PCR技术的反应步骤包括：
A．退火 B. 复性 C. 变性 D．引物延伸E．引物终止 3．DNA链末端合成终止法反应体系中含有
A．引物 B．dNTP C．ddNTP
35
D．S-a-dATP E．TaqDNA聚合酶 4．DNA链末端合成终止法反应体系中不含有
A．模板 B．TaqDNA聚合酶 C．ddNTP
35
D．化学裂解试剂 E．S-a-dATP 5．PCR技术可以用于
A．病原微生物的微量检测 B．突变基因的筛选 C. 法医学鉴定 D．DNA序列分析 E．克隆目的基因
6．克隆致病相关基因的策略包括
A．定位克隆 B．非定位候选克隆 C．功能克隆 D．定位候选克隆 E．随机克隆
四、问答题
1．何谓PCR?简述其基本原理、反应体系和主要步骤。 2．简述Sanger法测序的基本原理及大体过程。 3. 如果你有翻译活性很高的人酪氨酸酶的mRNA，请设计两个实验以鉴定某个克隆的基因片段是否为酪氨酸酶的基因?
参 考 答 案
一、名词解释
1．在DNA复性时，如把不同DNA分子或DNA与RNA分子放在同一溶液中，只要这些核酸单链分子之间存在一定程度的碱基配对关系，就可在不同分子间形成杂化双链，这种现象称核酸分子杂交。
2．将限制性内切酶酶切电泳后的DNA转移至NC膜上，再与核酸探针杂交的技术。 3．将电泳后的RNA转移至NC膜上，再与核酸探针杂交的技术。
4．将聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质转移至NC膜上，再与另一标记蛋白质分子(如抗体)杂交的技术。
5．不经电泳分离直接将样品点在NC膜上用于杂交的技术。
6．指采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断。由于常用硅芯片作为支持物，且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术，故称基因芯片技术。
7．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大上百万倍。
8．指从对一种致病基因的功能的了解出发克隆该致病基因的策略。血友病的第Ⅷ因子基因是以此策略克隆成功的。
9．指将目的基因整合人受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导人动物子宫，使之发育成个体，该个体能把目的基因继续传给子代，该技术称转基因技术。目的基因的受体动物就是转基因动物。
二、填空题
16．DNA RNA 蛋白质 17．引物 TaqDNA聚合酶 dNTP 含Mg2—’的缓冲液 1S．变性 退火 延伸 1Q．模板一引物杂交 引物延长与合成阻断 电泳 放射自显影直读图 20．遗传图分 析 物理图分析 转录图分析 序列图分析 资料的储存和利用 21．功能基因组学 蛋白质组学 22．功能性克隆 定位克隆 候选基因克隆 23．功能性克隆 定位克隆
三、选择题
A型题 1—10 11—20 21—30 31—40 41—50 5—60
B型题 1—10 11—20 21—30 31—40
X型题 1—10 11—20 21—30 31—40
四、问答题
1．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大百万倍。其基本工作原理是：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5，末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留复制的机制沿模板链
延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，使目的DNA片段得到大量扩增。其反应体系包
2+
括：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶、dNTP以及含Mg的缓冲液。PCR反应步骤为(1)变性：95℃，15s ；(2)退火：Tm-5C，一般为55℃，30s ；(3)延伸：72C L 5rain。此三步为一个循环，一般进行25～30次循环。最后一次循环的延伸反应时间应适当延长(5 min)，以获得较大量的DNA产物。
2．双脱氧末端终止法测序由Sanger创立，是常用方法之一。其基本原理是利用DNA聚合酶的聚合反应，在试管内复制待测DNA的随机长度的互补链。反应设A、T、C、G体系，其中分别加入适当比例的相应ddNTP，由于ddNTP缺少3，一OH，不能形成磷酸二酯键，而使合成反应终止，致使4管中所合成的产物为随机长度的终止于相应ddNTP的DNA片段。从总体看，4管中所有产物是一系列长度只差1个核苷酸的聚合链，经超薄高压电泳可将其一一分辨。 大体过程为： (1)单链模板的制备；可据M13噬菌体的特性，将目的基因用基因工程的方法插入M13复制型双链DNA中，培养扩增后，提取单链M13噬菌体作模板 (2)模板一引物杂交：引物与待测DNA的3‘端上游杂交。并沿5，一3，方向延长，所合成新链即待测DNA的互补链。(3)引物的延长与合成阻断：杂交液分4管，各管分别加入Klenow大片段、4种dNTP(其中一种被标记)、一种ddNTP和缓冲液，保温使引物延长并随机阻断。(4)电泳：四泳道超薄聚丙烯酰胺一尿素凝胶高压电泳。(5)放射自显影和读图：将凝胶板干燥后，与X线片夹在一起，使X线片在电泳带相应位置曝光、显影、定影后直读图像。自终端至始点读出新合成链的5’一3’序列，其互补链即为待测DNA的碱基序列。
3．(1)以酪氨酸酶RNA为模板合成的’’P标记的cDNA为探针，对克隆片段进行Southern杂交。
(2)克隆片段与酪氨酸酶mRNA杂交，mRNA翻译活性丧失，该克隆片段为酪氨酸酶的基因。
基因组学与医学
测 试 题
一、名词解释
1．人类基因组计划 2. 结构基因组学 3．功能基因组学 4．比较基因组学 5．基因病
二、填空题
1．Southern blotting用于研究一一——，、Northern blotting用于研究一一——，Western blotting用于研究一一——。
2．PCR的基本反应步骤包括一——、——和——三步。
3. 在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入——、————、——和——。 4．Sange法测序的基本步骤包括——、——、——和——。
5．人类基因组计划的主要研究内容包括 、 、 、 、 。 6．目前克隆致病相关基因的主要策略有——、——、——。
7．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是————，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是————。
三、选择题 A型题
1．人类基因组计划的主要研究内容不包括
A．遗传图分析 B．物理图分析 C．转录图分析 D. 序列图分析 E．蛋白质功能分析
2．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是 A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术 D．肽核酸技术 E. 反义核酸技术
第八章分子生物学常用技术的原理和应用与人类基因组学
