siRNA干扰转化生长因子β1表达对SD大鼠系膜细胞纤维连接蛋白的影响

siRNA干扰转化生长因子β1表达对SD大鼠系膜细胞纤

维连接蛋白的影响

毛华雄;易著文;吴小川;党西强;何小解;曹艳;莫双红

【期刊名称】《中华儿科杂志》 【年(卷),期】2007(045)007

【摘要】目的利用能够表达大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)siRNA的绿色荧光蛋白融合表达质粒载体(pGEFP-C1)转染SD大鼠系膜细胞系、干扰TGF-β1的表达,观察系膜细胞纤维连接蛋白(FN)的相应变化,探讨防治肾脏纤维化的新途径.方法 根据大鼠TGF-β1基因序列第538-556(A)和895-913(B)核苷酸序列,将A、B二段序列分别构建成小发夹结构,分别(A/B)或共同(A+B)插入一个pGEFP-C1载体中,得到3个重组载体,能够分别或同时表达针对A或(和)B序列的siRNA,分别转染系膜细胞后,通过ELISA和RT-PCR动态观察系膜细胞TGF-β1、FN的mRNA和细胞培养上清中蛋白浓度的变化,探讨二者变化的相互关系.结果 载体表达的siRNA与TGF-β1基因第538-556序列相同者,能够显著干扰48 h时间段TGF-β1 mRNA(RT-PCR)(P＜0.01)和蛋白分泌(细胞上清ELISA)(P＜0.01),脂质体转染刺激系膜细胞FN分泌显著增加,表现为对照组和TGF-β1未被有效干扰组,FN分泌于24 h时段达到峰值,而TGF-β1被干扰的实验组,FN峰值被推迟到48 h才出现(P＜0.01).结论 siRNA干扰系膜细胞TGF-β1的表达,能够减少FN的表达,但FN的表达可能并不完全依赖于TGF-β1. 【总页数】4页(494-497)

【关键词】RNA,小分子干扰;转化生长因子β;肾小球膜;大鼠,SPRAGUE-DAWLEY;纤维连接蛋白类