针刺“足三里”对免疫抑制大鼠的作用及穴区CGRP表达
影响的研究*
代巧妹1，王美峤1，颜培宇1，2△，尚艳琦1，梁 慧1，蔡文辉1，王 垚1 【摘 要】目的：观察针刺足三里对免疫抑制大鼠的作用及与穴区降钙素基因相关肽(CGRP)表达的相关性。方法：采用环磷酰胺腹腔注射法制备免疫抑制动物模型，将30只SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组和针刺组，每组各6只。检测各组大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数及白细胞计数；应用RT-PCR法检测各组大鼠穴区局部CGRP表达情况。结果：针刺组大鼠体重、脾脏指数、胸腺指数及白细胞计数与模型组相比显著增加；电针组和针刺组处理后穴区CGRPmRNA表达量显著下降，与模型组比较有显著性差异；针刺组下降程度显著高于电针组，两组比较有显著性差异，提示针刺方法和刺激量与CGRP表达呈现一定的量效关系。结论：针刺对免疫抑制大鼠有一定的治疗作用，其机制可能与针刺调节穴区神经肽的表达使局部CGRP表达下降相关。 【期刊名称】针灸临床杂志 【年(卷),期】2024(034)005 【总页数】4
【关键词】针刺；降钙素基因相关肽；足三里；免疫抑制 实验研究
足三里为胃经合穴，有补益脾胃、调和气血、祛邪防病之功。对针刺腧穴的作用机理研究证明：腧穴作用中的“调和气血”即包括了现代解剖学中的淋巴系统[1-4]。有报道针刺可以调整人体白细胞总数，使之趋向正常；家兔动物实验亦证实针灸足三里穴对白细胞总数有一定影响，且中性粒细胞的变化与白细胞
总数的变化呈平行关系。另有研究显示针刺足三里治疗疟疾可以使淋巴细胞的转化率提高[5]。这些研究表明足三里穴可能对免疫系统产生一定作用，但缺乏相关动物实验研究的进一步证实。皮肤重要神经递质的降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)与表皮和真皮内的多种靶细胞接触，可直接影响皮肤内重要的具有抗原提呈功能的树枝状细胞-郎格汉斯细胞以及微血管内皮细胞的功能。针刺调节神经末梢CGRP的释放，与针刺的神经保护、抗缺血、调节血压、调节胃肠运动、保护胃黏膜、免疫调节、镇痛作用等均有密切联系，这些研究结果提示CGRP可能参与针刺效应，而这种效应在不同的疾病中会引起不同靶器官效应[6-8]。在本研究中，笔者用免疫抑制剂环磷酰胺建立免疫抑制大鼠模型，使用传统针刺和电针两种方法针刺大鼠足三里穴，并研究局部穴区CGRP变化，从而揭示针刺治疗疾病的作用机制。
1 材料与仪器
1.1 实验动物
健康SD雄性大鼠30只，体质量280～350 g。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：scxk(京)2007-0001。 1.2 药品和试剂
Super M-MLV反转录酶(北京百泰克生物技术有限公司)，RNA simple Total RNA Kit(天根生化科技北京有限公司)，环磷酰胺(上海谷研实业有限公司)，2×Power Taq PCR MasterMix(北京百泰克生物技术有限公司)，RNase固相清除剂(北京天恩泽基因科技有限公司)，引物(生工生物工程上海有限公司)。 1.3 仪器
电针仪(汕头市医用设备厂)，凝胶成像分析仪(北京六一生物科技有限公司)，水
平电泳仪(北京六一生物科技有限公司)，PCR仪(杭州博日科技有限公司)，ADVIA 120血球分析仪(德国西门子公司)。
2 实验方法
2.1 实验分组及造模
正常SD雄性大鼠30只，随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组和电针组共5组，每组各6只。正常组小鼠不做任何处理，假手术组腹腔注射0.9%无菌生理盐水3天，第4天加强注射1次。其余各组均腹腔注射新鲜配制的环磷酰胺注射液(50 mg/kg)，连用3天，第4天加强注射1次，制备免疫抑制模型[9]。
2.2 针刺选穴及针刺操作方法
根据华兴邦《大鼠穴位针灸图谱》，取 “足三里”穴。针具选择30号针，进针3 mm。针刺手法：补法(重插轻提、徐徐捻转、吸气时进针)[8]。针刺组施行补法治疗，留针30 min，每日1次。电针组给予电针补法治疗，连续波，频率20 Hz，强度1～2 mA，持续30 min，每日1次。实验各组大鼠绑缚固定操作，正常组、假手术组及模型组分别绑缚但不针刺，治疗7天。 2.3 测定白细胞计数
大鼠尾静脉取血，用乙二胺四乙酸(EDTA)作为抗凝剂，用ADVIA-120 血球分析仪检测白细胞计数。 2.4 测定脾脏、胸腺指数
各组大鼠称重，无菌取大鼠脾与胸腺，称重，根据文献计算脾脏与胸腺指数[9]。 2.5 总RNA提取及cDNA的制备
治疗结束后，处死大鼠，取“足三里”区大约皮下10 mm×3 mm区域组织，
针刺“足三里”对免疫抑制大鼠的作用及穴区CGRP表达影响的研究
