茶叶中吡虫啉与啶虫脒农药残留速测技术研究
杨梅1，罗逢建1，陈宗懋1，赵颖2，朱国念2*
【摘 要】摘要：为进一步保障茶叶质量安全，促进水溶性农药在茶叶中的限制使用，研究了基于直接竞争免疫层析法原理的金标速测试纸条对茶叶中吡虫啉、啶虫脒农药残留快速检测效果。该速测卡可用于鲜叶和红茶、绿茶、乌龙茶、花茶等干茶样品中吡虫啉、啶虫脒的半定量测定，测定范围：＜0.05，0.05～0.50，＞0.50mg/kg，速测准确率达到90.5%以上，假阳性和假阴性概率分别低于2.4%和3.5%，能够满足欧盟和中国对茶叶中的吡虫啉、啶虫脒的最大残留限量的的不同检测要求。该速测卡具有检测时间短（10～15min）、灵敏度高（检出限为0.05mg/kg）、操作简单、成本低，对操作员技术水平要求低，在简易实验室，甚至室外就能进行现场检测等优点，可为政府等部门管理人员提供一种有效的监管、监测手段，可为企业收购农户及其他来源的茶叶以及拼配、出口和市场抽查等吡虫啉和啶虫脒的农残检测提供有效的初筛工具。 【期刊名称】中国茶叶 【年(卷),期】2018(040)002 【总页数】5
【关键词】吡虫啉-啶虫脒残留双联速测卡；水溶性农药残留；茶叶；速测效果 近年来，茶叶质量安全问题越来越受到关注，其中水溶性农药吡虫啉和啶虫脒农药残留现象时有发生，特别是出口欧盟农残超标频遭通报。目前，有关茶叶中吡虫啉、啶虫脒残留的检测方法主要有液相[1-2]、气相[3-4]及超高效液相色谱－串联质谱法[5]等，虽然这些方法检测灵敏度和精确度都较高，但要使用大型色谱仪器，难以在基层普及，不利于大面积监控。用于现场快速筛查农药残
留的方法主要是酶抑制法[6]，该方法主要用于检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残留，受基质干扰大，检测假阳性比率偏高。近年来，基于抗原－抗体特异性反应研制出烟碱类农药的ELISA试剂盒[7-8]，但其检测方法需要多步反应，不易于现场操作。因此，吡虫啉和啶虫脒金标速测试纸条技术将有效满足市场监测、企业收购、自查时的快速检测需求，笔者就该速测技术对茶叶中吡虫啉与啶虫脒农药残留快速检测的效果进行了研究。
一、材料与方法
1.水溶性农药速测卡的检测原理
基于直接竞争免疫层析法原理的金标速测试纸条（图1），可用于快速检测茶叶中吡虫啉和啶虫脒的残留。人工抗原和二抗以条带状固定包被于硝酸纤维素膜上分别作为检测线（T线）和对照线（C线），胶体金标记的抗体吸附在结合垫上，待测物与固定在硝酸纤维素膜上的包被抗原竞争结合金标抗体。将样品溶液滴加到试纸条一端的样本垫上后，在玻璃纤维的毛细作用下向另一端移动，流经金标抗体结合垫溶解金标抗体并一同向上层析迁移，至T线时，固定在硝酸纤维素膜上的包被抗原与待测物一同竞争性地结合有限的金标抗体。之后未与固定在硝酸纤维素膜上的包被抗原结合的金标抗体继续向上层析至C线，被固定在硝酸纤维素膜上的二抗特异性结合滞留于对照线并显色。通过肉眼观察比较T线和C线颜色的深浅差异进行结果判定：待测物浓度低于检出限时，C线和T线两条颜色相近；当待测物浓度等于或高于检出限时，T线的颜色随之变浅；当待测物达到一定浓度时，待测物完全占据金标抗体上的结合位点，固定在硝酸纤维素膜上的包被抗原未竞争结合到金标抗体，此时T线不显色。C线均显红色条带，若C线红色条带消失，则试纸条检测失效。
2.试验方案
选取涵盖华南、江南、西南等我国主要产茶地区的茶叶进行水溶性农药速测卡应用效果调查，包括安徽、重庆、四川、贵州、江西、山东、云南、河南、浙江、湖北、广东、福建共计12个省（市）。在每个地区寄送的速测样品（表1）中随机抽样，用液质联用方法分析检测，与速测结果不一致的样品，将随后进行第2次速测分析，计算出吡虫啉、啶虫脒在不同检测范围中速测卡的准确率、假阳性以及假阴性概率。 （1）速测卡测定步骤
鲜叶：称取2g样品，用研钵研磨后按1∶10（即1g样品，10mL开水）加入20mL开水，混匀静置10～15min至室温。
干茶：称取2g样品，按1∶30（即1g样品，30mL开水）加入60mL开水冲泡，混匀静置10～15min至室温。
用塑料滴管在平放的速测卡的两个加样孔中各滴入2滴提取液，10～15min内观察结果判断有效（图2）。 （2）速测卡结果判定
由图2可知，阴性（－）结果为T线（检测线，靠近加样孔端）与C线颜色显色接近，表明样品中吡虫啉、啶虫脒含量均低于0.05mg/kg。阳性（＋）结果为T线比C线颜色明显变浅或无显色，表明样品中吡虫啉、啶虫脒含量均高于0.05 mg/kg。无效为C线未显色，可能是操作不当或检测卡已失效。 （3）检测效果验证
样品加标试验：称取干茶（绿茶）、鲜叶（龙井43）空白样品各2g进行加标实验，干茶样品中加入吡虫啉和啶虫脒混标，添加水平分别为0、0.05、0.20、
茶叶中吡虫啉与啶虫脒农药残留速测技术研究
