子离子质谱图已知只有一种质量通过MS1(Q1),因此也已知所有碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生的,所以我们更相信由MS/MS产生的谱图的纯度。相对其它扫描模式,SRM模式对于目标物质最为灵敏,干扰也最低,一般用于定量分析。
Precursor ion
fixed Fragmentation
(CID) Product ion
fixed
9.其它事项 (1)流动相的选择
?? 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液,如甲酸铵、乙酸铵等,还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。
?? LC/MS接口避免进入不挥发的缓冲液,避免含磷和氯的缓冲
液,含钠和钾的成分必须<0.5mmol/l。(盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器)含甲酸(或乙酸)<1%。含三氟乙酸≤0.2%。含三乙胺<0.5%。含醋酸铵<2-5mmol/l。 ?? 送样前一定要摸好LC条件,能够基本分离,缓冲体系符合MS要求。
(2)流量和色谱柱的选择
?? 不加热ESI的最佳流速是1—50ul/min,应用4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流,目前大多采用 l—2.1 mm内径的微柱,TIS源最高允许lml/min,建议使用200—400ul/min
?? APCI的最佳流速~lml/min,常规的直径4.6mm柱最合适。 ?? 为了提高分析效率,常采用< 100 mm的短柱(此时UV图上并不能获得完全分离,由于质谱定量分析时使用MRM的功能,所以不要求各组分没有完全分离)。这对于大批量定量分析可以节省大量的时间。
(3)辅助气体流量和温度的选择
?? 雾化气(sheath gas)对流出液形成喷雾有影响,辅助气(Aux gas)影响喷雾去溶剂效果,碰撞气影响二级质谱的产生。 ?? 操作中温度的选择一般情况下选择温度高于分析物的沸点20℃ 左右即可。对热不稳定性化合物,要选用更低的温度以避免显著的分解。
?? 选用温度和气体流量大小时还要考虑流动相的组成,有机溶剂比例高时可采用适当低的温度和流量小一点的。
(4)样品的预处理:
从保护仪器角度出发,防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴,防止污染仪器,降低分析背景,排除对分析结果的干扰。
要求获得最佳的分析结果,从ESI电离的过程分析:ESI电荷是在液滴的表面,样品与杂质在液滴表面存在竞争,不挥发物(如磷酸盐等)防碍带电液滴表面挥发,大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态,增加电荷中和的可能。