高效液相色谱法测定猪饲料中喹乙醇含量
一．实验目的
1.掌握喹乙醇的提取方法
2.了解饲料中有毒有害物质的测定 3.通过本实验初步评定饲料的品质
二．实验背景
喹乙醇化学名为：2－[N－2－羟基－乙基]－氨基甲酰－3－甲基－喹恶啉
－1，4－二氧化物，分子式为：C12H13N3O4，是以邻硝基苯胺为原料合成的一种抗菌促生长剂，喹乙醇添加于饲料中，可使禽畜增加采食量，节约营养素，并在体内参加新陈代谢和同化作用，提高抗病能力，为较好的禽畜生长促进剂，相对于其他兽药，添加成本低，大部分饲料厂，特别是中小饲料厂多用其作为禽畜配合饲料的药物添加剂。但近些年来，很多学者对喹乙醇的毒性重新做了深入系统的研究与评价，认为它是一种基因毒剂和生殖诱变剂，有致突变、致畸作用，并且在动物体内会产生蓄积毒性，可通过食物链间接地对人体健康构成威胁。饲料中的喹乙醇的添加量必须严格控制在允许的量以内。因此，对饲料及饲料添加剂中喹乙醇的检测非常有必要。本实验采用高效液相色谱法对猪饲料中喹乙醇含量进行测定。
喹乙醇结构：
三．实验原理
色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
四．实验步骤
1.仪器与试剂
Agillent1100液相色谱仪（美国安捷伦公司），配有VDW紫外检测器和NT色谱工作站。喹乙醇标准对照品（中国兽药监察所，纯度99.6%），处理样品的甲醇为分析纯，流动相用甲醇为色谱纯（进口）。超声波清洗器，离心机。 2.样品预处理
用称量纸精确称取0.4g左右猪饲料，将称取的饲料转移至100mL棕色容量瓶中；往100mL棕色容量瓶中加入60-70mL15%甲醇-水溶液，在超声波水浴中超声提取15分钟，期间每5min震摇一次，取出，用15%甲醇-水溶液定容。过滤，整
1滤纸粗过滤：个过滤过程共分为两步：○为排除滤纸吸附的影响初始2mL滤液弃2注射器吸取粗滤液，用微孔滤膜过滤掉，然后继续过滤，取续滤液4～5mL。○
后供高相液相色谱仪分析。 3.色谱条件：
色谱柱： Agillent C18（3.9×150mm，4.5μm）; 流动相：15%甲醇-水溶液（体积比：15:85）; 流速1.0mL/min;
检测器波长：紫外分光检测器在260nm处检测 进样量：20uL
柱温：室温（柱温影响不大）
五．数据记录与实验结果
1.本次称取的饲料为0.4482g，测得喹乙醇含量为0.274633ng/uL。
0.274633?10?9?20?100g?320?10=61.261g/吨 ?60.4483?10吨由其结果可以得出该结果知该饲料中喹乙醇含量在国家规定限量50～100g/吨之内。
六．讨论
1.在样品处理过程中，那些步骤处理不当会带来误差？
首先，在称量喹乙醇过程中操作和读数要正确，容量瓶必须要用棕色的，超声波提取时，时间要充分；定容操作正确。
2.饲料中喹乙醇的含量如何？是否检出？提出你对结果的看法？
本次实验中测得的喹乙醇的含量为61.261g/吨，符合国家规定限量50-100g/吨，已经检测出喹乙醇，本次的结果较为满意，含量的测得建立在多种
因素之上，都满足时，使结果更加准确。 3.为什么实验用棕色容量瓶？
由于喹乙醇遇光易分解,因此实验中用棕色容量瓶，且在测定过程中应避开光线的直接照射。
4.如何确定本方法的可行性？
我们需对实验方法的准确性、精密度进行考虑。准确度的验证可进行加标回收率实验，并用空白样品实验消除其他干扰因素影响。实验精密度可通过多次平行实验结果的相对标准偏差反映，如平行测定5次，测定峰保留时间与含量，再计算相对标准偏差。
高效液相色谱法测定猪饲料中喹乙醇含量
