此资料由网络收集而来，如有侵权请告知上传者立即删除。资料共分享，我们负责传递知识。 2020届高三生物一轮复习精讲精练 第40讲 无菌操作技术实践 苏
教版
1．涵盖范围
本单元包括选修1全部内容——无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物学技术实践。 2．考情分析
考查力度：相对固定，如山东理综只出一个8分的简答题。 考查内容及形式：
(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。
(2)酶的研究与应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。 (3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。 (4)传统发酵技术及实践应用多以简答题形式考查。 (5)酶的研究、DNA和蛋白质提取技术多以选择题形式考查。 3．复习指导 (1)复习线索
①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索，系统复习微生物培养技术、酶的研究和实践应用。
②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质提取等有关知识。
(2)复习方法：①列表比较法——DNA、蛋白质的提取与分离。②实践联系——发酵技术、植物有效成分提取技术。③实验联系——植物组织培养、微生物培养实验过程。
第40讲 无菌操作技术实践
[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择利用。4.植物的组织培养。
考点一 微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术
1．培养基的判断
此资料由网络收集而来，如有侵权请告知上传者立即删除。资料共分享，我们负责传递知识。 (1)据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型 (2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分
( × )
( √ )
(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求
( √ )
2．制备固体培养基的流程
计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 3．无菌技术连接(连一连)
4．纯化大肠杆菌的方法
常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
(1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面。 5．微生物的接种过程
准备接种→接种环灭菌→试管灭菌→挑取少量菌体→划线接种→培养 易错警示 (1)自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同
①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。 ②含氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。
(2)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项
①倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (3)平板划线操作的注意事项
①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。
②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 ③划线时最后一区不要与第一区相连。
此资料由网络收集而来，如有侵权请告知上传者立即删除。资料共分享，我们负责传递知识。 ④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
1．下列无菌操作中，错误的是
( )
A．无菌操作的目的是防止杂菌污染 B．用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒 C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 答案 D
解析 对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止瓶口的微生物污染培养基。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物，用酒精擦拭不能达到目的。
2．下列是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：
试剂 用量 牛肉膏 5 g 蛋白胨 10 g NaCl 5 g 琼脂 20 g 水 1 000 mL (1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、____________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是__________________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行__________处理。该培养基从物理性质上分类属于____________。
(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________和____________________。 (3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举两项) ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 答案 (1)氮源 牛肉膏和蛋白胨 灭菌 固体培养基 (2)平板划线法 稀释涂布平板法 (3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染(任选两个)
解析 培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源。配制培养基时加入了琼脂，因此该培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。分离纯化微生物一般用平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法中每次划线前都要将接种环灼烧灭菌，以杀死上次划线时接种环上残留的菌种；采用稀释涂布平板法时稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。
1．培养基的营养构成
2020届高三生物一轮复习精讲精练 第40讲 无菌操作技术实践 苏教版
