常用分子生物学技术的原理及其应用
一、选择题 （一） A 型题
1 ．分子杂交实验不能用于
A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是
A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针
A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为
A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是
A ． 90 ℃ B ． 72 ℃ C ． 80 ℃ D ． 95 ℃ E ． 60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是
A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是
A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移
8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹
9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板
A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是
A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是
A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要
A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要
A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是
A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理
C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是
A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为
A ．转基因技术 B ．基因灭活技术 C ．核转移技术 D ．基因剔除技术
E ．基因转移技术
17 ．目前主要克隆的致病基因是
A ．糖尿病致病基因 B ．恶性肿瘤致病基因 C ．单基因致病基因 D ．多基因致病基因 E ．高血压致病基因 18 ．基因疫苗主要是指
A ． DNA 疫苗 B ． RNA 疫苗 C ．反义核酸 D ．核酶 E ．小干扰 RNA 19 ．目前基因治疗中选用最多的基因载体是
A ．噬菌体 B ．脂质体 C ．逆转录病毒 D ．腺病毒相关病毒 E ．腺病毒 20 ．目前基因治疗多采用的方法是
A ．基因增补 B ．基因置换 C ．基因矫正 D ．基因灭活 E ．基因疫苗 （二） B 型题
A ． Southern blotting B ． Northern blotting
C ． Western blotting D ． dot blotting E ． in situ hybridization 1 ．不需要电泳、转膜等程序
2 ．电泳前不需进行限制性内切酶消化 3 ．靠电转移完成生物大分子的转移
4 ．直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交 A ．逆转录 PCR B ．原位 PCR C ．实时 PCR D ．多重 PCR E ． RFLP
5 ．将目的基因扩增与定位相结合 6 ．能动态检测反应过程中的产物量
7 ．将 RNA 的逆转录和 PCR 反应联合应用的一项技术 8 ．在同一反应中采取多对引物
A ．功能克隆 B ．定位克隆 C ．转基因技术 D ．核转移技术 E ．基因剔除 9 ．也叫基因靶向灭活
10 ．该技术中，被导入的目的基因称为转基因
11 ．从对基因编码产物的功能的了解出发克隆致病基因 A ．基因疫苗 B ．基因矫正 C ．基因置换 D ．基因增补 E ．基因失活
12 ．目前基因治疗采用最多的方法是
13 ．将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是
14 ．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是 15 ．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是 A ．酵母双杂交技术 B ．标签蛋白沉淀 C ．电泳迁移率变动测定 D ．染色质免疫沉淀 E ．荧光共振能量转换效应分析 16 ．凝胶阻滞实验 17 ．需要设计诱饵基因 18 ．近年该技术与芯片技术结合在一起，成为一项鉴定特定核蛋白的 DNA 结合靶点的新技术 （三） X 型题
1 ．核酸探针可以是
A ．人工合成寡核苷酸片段 B ．基因组 DNA 片段 C ． RNA 片段 D ． cDNA 全长或部分片段 E ．核苷酸
2 ．核酸分子杂交可以形成的杂化双链有
A ． DNA/DNA B ． RNA/RNA C ． DNA/RNA D ．寡核苷酸 /RNA E ．寡核苷酸 /DNA 3 ． PCR 技术主要用于 A ．目的基因的克隆 B ．基因的体外突变 C ． DNA 和 RNA 的微量分析 D ． DNA 序列测定 E ．基因突变分析 4 ．分子杂交技术的原理涉及
A ．分子杂交特性 B ．基因文库 C ．印迹技术 D ．生物芯片 E ．探针技术 5 ．关于 DNA 链末端合成终止法正确的是 A ．需加入的链终止剂 ddNTP B ． dNTP 需要标记 C ．引物也需要标记 D ．又称 Sanger 法 E ． ddNTP 缺乏 5 ' -OH 6 ．基因组 DNA 文库建立需要
A ．基因组进行限制性内切酶消化 B ． DNA 片段克隆到相应载体中 C ．重组体感染宿主菌 D ．筛选目的基因可以通过核酸分子杂交的方法进行 E ．以 λ 噬菌体为载体的人基因组 DNA 文库的克隆数目至少应在 10 6 以上 7 ．用于构建基因组 DNA 文库的载体有
A ．酵母人工染色体 B ．粘粒 C ． λ 噬菌体 D ．腺病毒 E ．脂质体 8 ．基因诊断较常规诊断其特点有
A ．属于病因诊断 B ．特异性强 C ．适用范围窄 D ．灵敏度高 E ．有放大效应
9 ．基因失活的常用技术包括
A ．基因疫苗 B ．核酶 C ．小干扰 RNA D ．反义核酸 E ．基因置换 10 ．克隆羊多莉的产生属于
A ．同种异体细胞转移技术 B ．同种异体细胞核转移技术 C ．试管内受精 D ．无性繁殖 E ．同种异体细胞转基因技术 11 ．疾病动物模型可用于
A ．探讨疾病的发生机制 B ．克隆致病基因 C ．新治疗方法的筛选系统 D ．新药物的筛选系统 E ．新疾病模型的筛选系统 12 ．蛋白质芯片主要应用于
A ．蛋白质结构的研究 B ．蛋白质表达谱的研究 C ．蛋白质功能的研究 D ．蛋白质之间的相互作用研究 E ．疾病的诊断和新药的筛选 13 ．研究蛋白质相互作用的技术包括
A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶阻滞实验 D ．噬菌体显示筛选系统 E ． DNA 印迹 14 ．基因治疗的基本程序包括
A ．治疗性基因的选择 B ．基因载体的选择 C ．靶细胞的选择 D ．基因转移 E ．回输体内
15 ．目前可用作基因治疗的基因载体包括
A ．腺病毒相关病毒 B ．噬菌体 C ．腺病毒 D ．逆转录病毒 E ．粘粒 二、是非题
1 ． Southern blot 主要用于 RNA 的定性和定量分析。
2 ．蛋白质印迹分析技术中蛋白质的转移，可以用电转移，也可以靠毛细作用转移。 3 ．实时 PCR 技术与普通 PCR 技术相比，它可以动态监测反应过程中产物的量。
4 ． Sanger 法在测定核酸序列时，反应管中加入的 dNTP 仅标记一种即可。 5 ．生物芯片可以是 DNA 芯片、 cDNA 芯片或蛋白质芯片。
6 ．酵母双杂交技术是分析 DNA— 蛋白质相互作用的一项重要技术。 7 ．核转移技术，是指将动物体细胞核全部导入另一个体去除了胞核的卵细胞内，使之发育成个体。 8 ．基因矫正是用正常的基因通过体内基因同源重组，替换致病基因来达到治疗目的。
9 ．目前基因治疗多采用基因增补的方式。
10 ． RNA 印迹技术中， RNA 分子在转移前需进行限制性内切酶切割。 11 ． PCR 反应中变性主要是使模板 DNA 完全变性为单链。
12 ．实时 PCR 技术中， TagDNA 聚合酶在链延伸过程中遇到荧光探针，可发挥 3 ' →5 ' 核酸外切酶活性。
13 ．酵母双杂交系统可用于证明两种已知基因序列的蛋白质可以相互作用的生物信息学推测。
14 ．转基因技术即动物克隆技术，是无性繁殖。
15 ．内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起恶性肿瘤。
16 ．基因转移和基因剔除技术在医学中最重要的用途是建立疾病动物模型。 17 ．定位克隆是指从对基因编码产物的功能的了解出发来克隆致病基因。 18 ．目前 DNA 序列分析是找出患者有关基因变异所在的最为直接和确切的基因诊断法。 三、填空题 1 ．分子杂交是利用 DNA 和 这一基本性质来进行 DNA 或 RNA 定性、定量分析的。
2 ．在印迹技术中，将 DNA 片段在琼脂糖凝胶中 使其成为 ，利用 使胶中的生物大分子转移到 膜上，使之成为固相化分子。 3 ．印迹技术的基本流程依次为 、 、 和 。
4 ． Southern blotting 主要用于 定性和定量分析，亦可用于 和 的分析。 5 ． Northern blotting 主要用于检测 的表达水平，敏感性较 PCR ，但其具有 和 的优点。
6 ． Western blotting 主要用于检测样品中 的存在、细胞中 以及 的相互作用研究等。
7 ． PCR 的基本反应步骤包括 、 、 。
8 ．基因芯片适用于分析不同组织细胞或同一细胞不同状态下的 ，其原理是基于 。
9 ．在转基因技术中，被导入的目的基因称为 ，目的基因的受体动物称为 。 10 ．标签融合蛋白结合实验主要用于证明 是否存在直接的物理结合，分析结合的 及筛选细胞内与融合蛋白相结合的 。
11 ．染色质免疫沉淀法是目前可以研究 与 相互作用的主要方法。 12 ．目前克隆致病相关基因主要有 和 两大策略。
13 ．根据受体细胞的类型不同，基因治疗分为 的基因治疗和 的基因治疗两大类。
14 ．目前使用的基因载体有 和 两大类。
15 ．在人类基因治疗实施中，导入基因的方式有 和 两大类。 四、名词解释
1 ． probe
2 ． blotting technologe 3 ． gene libary 4 ．核转移技术 5 ． gene chip 6 ． gene therapy 7 ． gene diagnosis 8 ．基因疫苗
9 ． gene inactivation 10 ． gene replacement 11 ． gene augmentation 12 ． PCR
13 ． ex vivo 五、问答题
1 ．简述印迹技术的分类及应用。
2 ．简述 PCR 反应体系的基本成分、 PCR 的基本反应步骤和主要用途。 3 ．简述 PCR 技术的基本原理。
4 ．简述逆转录 PCR 、原位 PCR 和实时 PCR 技术的基本原理和主要区别。 5 ．简述 DNA 链末端合成终止法（ Sanger 法）测序的基本原理。 6 ．简述基因转移和基因剔除技术在医学发展中的作用。 7 ．简述酵母双杂交技术的基本原理及应用。 8 ．试述染色质免疫沉淀法基本原理及用途。 9 ．简述基因诊断的概念及特点。
10 ．何为基因治疗，目前基因治疗有哪些基本策略？ 11 ．试述基因治疗的基本程序。
12 ．欲生产一种药用多肽，科学家已经将此多肽的基因与某真核表达质粒重组在一起。请你设计一个实验，利用 PCR 方法鉴定此重组表达质粒是否含有这一多肽的基因。
13 ．请设计一个实验，利用酵母双杂交系统检测从某一癌组织中提取、纯化的一种未知蛋白质 X 与两种已知蛋白质 a 、 b 之间是否有相互作用。
14 ．请为某一单基因遗传病（低表达或不表达）的患者设计一个基因治疗方案。
21 生物化学习题与解析--常用分子生物学技术的原理及其应用
