《微生物学实验》课程
教学大纲
课程名称（中文）：微生物学实验
课程名称（英文）：Experiment in Microbiology
食品科学与工程、食品质量与安全专业 渤海大学生物与食品科学学院食品检验教研室
二零零四年十月
微生物学实验教学大纲
一、开课对象
食品质量与安全和食品科学与工程专业 二、所需先修课程
基础生物学、生物化学 三、实验教学内容
1．微生物形态学实验 2．微生物营养学实验 3．微生物生理学实验
上述实验分别由2～4个实验有机地组合在一起形成一个系统的综合性的实验。该实验是微生物学的基础实验，以微生物生物学为主线分别设立微生物形态学、微生物营养学和微生物生理学实验。 四、实验目的
通过微生物学的实验教学，学生掌握微生物基本操作能力和基本研究方法，为本专业的后续课程《动物流行病学》、《食品微生物检验》、《肉品卫生检验》等打下坚实的基础。本课程实验将原来的微生物10个实验组合为3个综合性实验，目的在实验过程中注重培养学生的综合实验能力，提高学生专业素质。 五、实验教学重点、难点及教学方式
实验重点、难点及教学方式综合表
表1 内容 重点（难点）内容简述 指导方式 序号 1 油镜的原理与使用 教师讲解示范并挑选学生演练 2 细菌涂片及革兰氏染色 教师讲解示范并挑选学生演练 3 培养基的制备 教师讲解示范并挑选学生演练 4 高压灭菌原理、方法和注意事项 教师讲解示范并挑选学生演练 5 平板划线分离 教师讲解示范并挑选学生演练 6 液体稀释分离 教师讲解示范并挑选学生演练 7 细菌接种与培养特征 学生讨论与教师讲解相结合 8 糖发酵试验的原理和操作方法 学生讨论与教师讲解相结合 9 吲哚试验的原理与操作方法 教师讲解示范并挑选学生演练 10 V—P 试验的原理、操作方法及注意事项 学生讨论与教师讲解相结合 11 柠檬酸盐试验的原理和操作方法 教师讲解示范并挑选学生演练 六、对学生的实验操作技能、能力和科学作风等方面的要求
表2 概述 与哪些教学内容有联系 1．显微镜技术 1．普通生物学中的动植物细胞形态学 实验 2．细菌制片染色技术 2．分析化学中的酸碱滴定 操作 3．培养基制作与高压灭菌技术 3．生物化学中的糖代谢 （技能） 4．微生物分离培养技术 4．物理学中的光学 5．微生物生理生化实验技术 1．生物学形态观察能力 1．普通生物学中的动植物细胞形态特征观察 2．分析判断和综合思维能力 2．分析化学中的酸碱滴定操作 学生的 3．独立的实验操作能力 3．生物化学中的糖代谢分析 能力 4．无菌操作素养 4．物理学中的光学部分 5．实验写作能力 1．培养学生良好的操作规范 1．普通生物学中的动植物细胞形态特征 科学 2．培养学生求真务实的实验作风 2．分析化学中的酸碱滴定 作风 3．培养学生强烈的求知精神 3．生物化学中的糖代谢 4．培养学生的卫生安全意识 4．物理学中的光学部分
5．遵守实验纪律 七、实验教学条件，根据具体组（类）实验提出并列表说明
**组（类）实验条件明细表
规格 数量 一、 仪器设备 1000× 20 1．电光源显微镜 双面单人 4 2．无菌操作台 立式 2 3．高压灭菌锅 180℃ 1 4．电热恒温干燥箱 数字式 2 5．酸度计 36℃±1℃ 2 6．恒温培养箱 46℃±1℃ 4 7．电热恒温水浴锅 0～4℃ 1 8．冰箱 4 9．培养基分装装置 0g～500g 4 10．架盘药物天平 4× 4 11．放大镜 0.0001g～10g 1 12．电子天平 1μl～1mL 1 13． 微量吸管 14．其它 二、培养基 配制 1．糖发酵培养基 配制 2．柠檬酸盐培养基 配制 3．蛋白胨水 配制 4．葡萄糖蛋白胨水 配制 5．营养琼脂 配制 6．各类生化试剂 配制 7．其它 三、玻璃器皿 1．灭菌吸管 1mL/10mL 2．灭菌锥形瓶 500mL 3．灭菌培养皿 Φ100 4．灭菌试管 大、中、小 5．灭菌刀、剪子、镊子等 四、染色液 1．革兰氏染色液（草酸铵结晶紫、碘液、乙醇、沙黄） 2．美兰染色液 3．碱性复红染色液 4．孔雀绿染色液 五、菌种 1．变形杆菌 冻干制品 2．大肠杆菌 冻干制品 3．金黄色葡萄球菌 冻干制品 4．枯草芽孢杆菌 冻干制品 5． 产气肠杆菌 冻干制品 6．米曲霉 冻干制品 7．青霉 冻干制品 8．酿酒酵母 冻干制品 六、各类细菌涂片、动植物组织切片
名称 表3 是否具备 是 是 是 是 是 是 否 是 是 否 否 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 否 是 是 是
八、实验考核
1．考核的内容
① 实验的基本操作；
② 实验报告，注重考察学生实验的主动性、分析问题和解决问题的能力； ③ 实验纪律与实验卫生； ④ 实验出勤。
2．对实验报告评阅，主要是看学生是否能按实验的要求独立完成实验，报告撰写是否能反映出学生的能力和素质。
3．考核评分，总分10分。按照渤海大学实验教学成绩评定暂行规定中的成绩评定办法给出实验成绩。
九、教学进度
表4 实验内容概述 所用学时 周 实验类型 12 1．微生物形态学实验 3～5 综合性 10 2．微生物营养学实验 10～12 综合性 8 3．微生物生理学实验 14～16 综合性 总学时数：30 十、思考题与参考资料
（一）思考题
1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？
2．影响显微镜分别率的因素有哪些？
3．你认为制备细菌染色标本时，尤其要注意哪些环节？
4．你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 5．你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。
6．培养基配好后，为什么必修立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？ 7．在配制培养基的操作过程中应注意什么问题？为什么？
8．高压灭菌开始之前，为什么要将锅内的冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降到“0”时才能打开排气阀，开盖取物？
9．在使用高压蒸汽灭菌时，怎样杜绝一切不安全因素？
10．如何确定平板上某个单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。
11．你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单个菌落？如果不是，请分析原因。
12．接种环接种前后灼烧的目的是什么？为什么在接种前一定要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环已冷却？
13．如何描述各种微生物在斜面上、半固体和液体培养基中的培养特征？ 14．假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？ 15．讨论IMVIC试验在食品检验中的意义？
16．为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气杆菌为阴性？这个试验与V—P试验最初底物和最终产物有何异同处？为什么会出现不同？
17．洗手前后的手指平板，菌落数有无区别？ 18.灭菌在微生物实验操作中有什么重要意义？
19.为什么干热灭菌比湿热灭菌所需的温度高，时间长？请设计干热灭菌与湿热灭菌效果比较实验方案。 20.在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？
21.在进行糖发酵试验时如何区分氧化产酸和发酵产酸，目的和意义是什么？ 22.在进行V—P试验时，判断试验结果阳性与阴性的标准和操作步骤如何？ 23.柠檬酸盐试验是一类什么性质的试验，如何判断试验的结果？
24.讨论大肠杆菌IMVIC的实验结果在肠杆菌科鉴定中的重要意义？
25.在进行吲哚试验时，向培养基中加入吲哚应注意哪些问题？有什么作用？ 26.比较各种不同来源的食品样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？
27.人多地实验室与无菌室相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？
28.通过微生物环境分离实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你学到些什么？如何利用到食品保藏方面？
29.什么是物镜的同焦想象？它在显微镜观察中有什么意义？
30.试列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ （二）参考资料
[1] 沈萍，范秀荣，李广武主编．微生物学实验（第3版）[M]. 北京:高等教育出版社，1996，6 [2] 周德庆主编．微生物学实验手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1986 [3] 林稚兰，黄秀梨主编. 现代微生物学与实验技术[M]． 北京：科学出版社，2000
[4] 周阜棣，俞子牛，何绍江主编．农业微生物学实验技术[M]．北京：中国农业出版社，1996 [5] 徐孝华主编．普通微生物学[M]．北京：北京农业大学出版社，1992
[6] 武汉大学，复旦大学生物系微生物教研室编．微生物学（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，1987 [7] 徐岩,等译.James M.Jay 编著. 现代食品微生物学[M]. 北京: 中国轻工业出版社, 2001.7 [8] 赵斌，何绍江主编，《微生物学实验》，科学出版社，2002。
指导教师签字：白凤翎： 2004年8 月 20 日
是的，又到春分时分，今日已是昼夜平分春色，这也意味着，我们的春天，转眼已经走到一半。不禁，有了些许淡淡的怅然。这岁序更迭啊，从来不会给任何人眷恋的机会。我们甚至来不及感叹，便匆匆走向下一个节气。 不经意间，我们走着走着，便把春天走成了姹紫嫣红，草长莺飞。此时正是，春风又绿江南岸，万紫千红总是春。是春风花草香，又把新桃换旧符。那些走过的时光，随手握一把，满是春天新鲜的味道，沁满春日阳光的暖。 这春风啊，总是来的那么急，那么声势浩荡，带着泥土松软的芳香，带着小河流水的哗哗声，还有桃花杏花梨花的艳。我们无需刻意寻芳，自有满眼的春色，惊艳了原本平淡的生活。 这就是春天，无论走着，还是睡着。一抬头，就会遇见一树花开。一低眉，便会遇见一行青柳。那些匆匆擦肩的路人，已是换了薄薄的春衫，令你眼前一亮，心情也随之明媚起来。 沿河缓缓行走，总会有姹紫嫣红的花事，与你撞个满怀。那小桃红，玉兰粉，梨花白，连翘黄，还有那些婀娜的柳丝，瞬间让时光变得柔软，而诗意！ 最喜欢，吹面不寒杨柳风，斜风细雨不须归。漫步柳堤，踏着柔软的土地，看风吹叶绿，看花开满枝，心儿也随风怒放。这轻轻杨柳风，这悠悠桃花水，如诗，如画，是否也会醉了你的眼？
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