江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征及病原谱研究*
杨洋1，龚甜2，殷小龙1，施勇2，周珺2 （1、南昌大学第二附属医院，南昌 330006；2、江西省疾病预防控制中心，南昌 330029）
【摘 要】摘要：目的 了解江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征及病原谱。方法 对2011年135例江西省流行性出血性结膜炎患儿临床特征进行分析，并采用PCR和RT-PCR方法对这135例患儿结膜拭子同时进行肠道病毒70型、柯萨奇病毒24型变异株和腺病毒3种病毒检测。结果 2011年江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征还是以眼红、眼部疼涩和异物感伴眼睑水肿，结膜充血和分泌物多症状为主，其中，48.15%出现伪膜，35.56%出现发烧症状；PCR和RT-PCR检测结果为腺病毒阳性103份，占98.10%，肠道病毒70型阳性2份，占1.90%。结论 2011年江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征还是以眼红、眼部疼涩和异物感伴眼睑水肿，结膜充血和分泌物多症状为主；病原谱主要由腺病毒和HEV70两种病毒组成，腺病毒为绝对优势病原。 【期刊名称】江西医药 【年(卷),期】2016(051)008 【总页数】2
【关键词】流行性出血性结膜炎；肠道病毒70型；腺病毒；临床特征
流行性出血性结膜炎 （epidemic hemorrhagic conjunctivitis，EHC）俗称红眼病，是近40年来世界暴发流行的一种新型急性病毒性眼病；其病原体为肠道病毒70型（Human Enterovirus 70，HEV70）、柯萨奇病毒A组24型的一个变种（Coxsackievirus A24 variant，CVA24v）和腺病毒，本病接触传染性极强，潜伏期很短，接触传染源后2h-48h内双眼同时或先后发病［1，2］。
由于其传染性极强，又缺乏有效的治疗方法，EHC会严重影响当地经济，并会消耗大量的医疗卫生资源。我国自1971年上海、北京等地区发生大流行以来，就不断发生过流行。虽然EHC是《中华人民共和国传染病防治法》中规定的丙类传染病，但目前我国还没有建立非常完善的EHC病原学监测系统。本研究首次对江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征及病原谱进行研究，现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本采集和处理 标本采自2011年4月至11月经南昌大学第二附属医院门诊诊断为流行性出血性结膜炎的病例135例，用无菌棉拭子擦拭患者的结膜，结膜拭子标本保存在3ml病毒标本运输液（含5%牛血清、终浓度2000U/ml青霉素、200μg/ml链霉素和25U/ml制霉菌素的细胞培养液）。 1.2 病毒PCR和RT-PCR检测
1.2.1 病毒核酸提取 取结膜拭子标本200μl，采用Qiagen公司的QIAamp MinElute Virus Spin Kit（Cat No：57704）提取病毒RNA和DNA，具体操作步骤参照试剂盒说明书。
1.2.2 HEV70、CVA24v和腺病毒基因检测 引物：对提取的核酸同时进行HEV70、CVA24v和腺病毒三种病毒核酸检测，检测引物［4］由上海生工合成，引物具体序列如下：
HEV70：上游引物为5'-AGGGATTCACCAGA CATTGG-3'，下游引物为5'-ATTTTCCACCAGGCA CTCTG-3'，产物大小为242bp
CVA24v：上游引物为5'-GTGAGTGCTTGCCC AGATTT-3'，下游引物为5'-CTCCACTAGTGAGCG GTGTG-3'，产物大小为184bp
腺病毒：上游引物为5'-GCCSCARTGGKCWT ACATGCACATC-3'，下游引物为5'-CAGCACSCCI CGRATGTCAAA-3'，产物大小为301bp
扩增反应：⑴HEV70和CVA24v RT-PCR反应 采用QIAGEN公司的One Step RNA PCR Kit （Cat No：210212）试剂盒进行逆转录扩增，反应体系为 25μl，其中 RNA模板 5μl，10×PCR Buffer 5μl，dNTP 1μl，Taq DNA聚合酶和AMV逆转录酶酶1μl，RNA酶抑制剂0.1μl，上下游引物各0.5μl，蒸馏水11.9μl。反应条件：60℃1min，42℃10min，50℃30mim，95℃15min，PCR循环如下：94℃30s，50℃30s，72℃1min，35次循环；72℃10min。⑵腺病毒PCR反应采用Promega公司的Go Taq Green Master Mix（Cat No：M7122）试剂盒进行核酸扩增，反应体系为 25μl，其中 DNA模板 5μl，Go Taq Green Master Mix（2X）12.5μl，上下游引物各0. 5μl，蒸馏水6.5μl反应条件：94℃5min，PCR循环如下：94℃ 40s，55℃ 40s，72℃ 1min，35个循环；72℃10min。PCR扩增产物在含溴化乙锭的2%琼脂糖电泳，在自动凝胶成像系统下观察结果。
1.3 统计方法 采用Microsoft Excel 2003对数据进行整理和分析。
2 结果
2.1 临床表现 所有患儿均有不同程度眼红、眼部疼涩和异物感伴眼睑水肿，结膜充血和分泌物多症状，其中7例患儿出现球结膜出血灶，48例患儿出现伪膜，31例患儿出现发烧症状，17例患儿同时出现伪膜和发烧症状，1例患儿出现瘙痒症状。
2.2 病毒核酸检测情况 135份眼拭子标本中，病毒核酸阳性105份，阳性率为77.78%。其中，腺病毒阳性103份，占98.10%，HEV70阳性2份，占
江西省儿童流行性出血性结膜炎临床特征及病原谱研究
