鲫鱼肉中DHA和EPA的分析
李铁纯,侯冬岩,回瑞华,刁全平
【摘 要】摘 要 对鲫鱼肉中DHA和EPA进行分析.采用有机溶剂提取鲫鱼肉中脂肪油,将脂肪油中的脂肪酸进行甲酯化,用气相色谱-质谱联用法鉴定鲫鱼肉中的DHA和EPA,并测定其相对百分含量.采用高效液相色谱法定量分析鲫鱼肉中DHA和EPA的含量.DHA的标准偏差为0.67%,EPA的标准偏差为0.38%.DHA的回收率为97.16%~104.20%,EPA的回收率为94.71%~101.10%.实验结果表明:气相色谱-质谱联用法测定鲫鱼肉中含DHA相对百分含量为5.33%,EPA相对百分含量为8.12%;高效液相色谱法测得鲫鱼肉含DHA18.56 μg /g,含EPA89.76 μg /g. 【期刊名称】《鞍山师范学院学报》 【年(卷),期】2019(021)004 【总页数】4
【关键词】关键词 鲫鱼肉;DHA;EPA;气相色谱-质谱联用;高效液相色谱 文章篇号 1008-2441(2019)04-0042-04
DHA和EPA主要来源于鱼类、海藻类及菌类,是人体自身不能合成的必需脂肪酸,它们具有不同的生理活性[1,2].DHA对缓解眼疲劳、恢复视力有很大作用,EPA可抑制血小板聚集,预防形成血栓,使血液黏度下降,改善血液循环,降低血压,可治疗高脂血症、动脉粥样硬化等[3-6].近年来,随着人们健康意识的增强,国内外对DHA和EPA的研究报道较多.在国外,以富含DHA和EPA的保健品很多,我国这方面起步较晚,但是发展很快.目前,关于鲫鱼肉中DHA和EPA的分析少见报道.本文采用气相色谱-质谱联用法鉴定鲫鱼肉中
DHA和EPA,并测定其相对百分含量[7-9],采用高效液相色谱法定量分析鲫鱼肉中DHA和EPA的含量,为从鲫鱼肉中提取DHA和EPA提供分析方法.
1 仪器与药材
1.1 实验仪器
美国Hewlett Packard公司生产的6890-5973气相色谱-质谱联用仪;美国Waters公司生产的1525-2996-tcm 液相色谱仪;上海亚荣生化仪器厂生产的RE-52C型旋转蒸发器等. 1.2 实验药材
石油醚(60~90 ℃)、正己烷、甲醇、氯仿、氢氧化钾(所用试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水)
样品:购于鞍山水产市场,鲫鱼5尾,每尾均150 g左右. EPA和DHA标准品,纯度99.99%,美国贝斯药物技术有限公司. 1.3 样品前处理
将新鲜的鲫鱼用清水洗净后去皮取肉,将其肉剪碎.
2 GC-MS法分析鲫鱼肉中DHA和EPA
2.1 鲫鱼肉中脂肪油的提取
准确称取一定量经1.3处理过的鲫鱼肉放入锥形瓶中,分别加入适量甲醇-氯仿(2∶1.5,体积比)溶液和蒸馏水,搅拌24 h后加入适量氯仿和蒸馏水,再搅拌30 min,经过滤,取有机相得到黄色透明油状提取液.鲫鱼肉脂肪油提取率为12.0%.
2.2 甲酯化处理
取适量2.1提取的脂肪油加入适量正己烷和0.5 mol/L的KOH-CH3OH溶液,
回流20 min,冷却至室温,超声提取并离心.取上清液,待做GC-MS分析. 2.3 色谱分析
弹性石英毛细管柱:HP-5(30 m×0.25 mm×0.33 μm);柱温:150 ℃升到200 ℃,升温速率为10 ℃/min,200 ℃升到250 ℃,升温速率为5 ℃/min,250 ℃升到280 ℃,升温速率为10 ℃/min(保持 5 min);汽化室温度为300 ℃;分流比:50∶1. 2.4 质谱条件
电子轰击源;离子源温度220 ℃;接口温度230 ℃;扫描范围m/z:20~500.
2.5 测定方法及结果
取经2.2处理过的样品,进行GC/MS分析.鲫鱼肉脂肪酸甲酯组成的总离子流图如图1.鲫鱼肉脂肪酸甲酯组成及相对百分含量测定结果如表1.
由表1可知,鲫鱼肉中鉴定出4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸,即DHA为5.33%;5,8,11,14,17-二十碳五烯酸,即EPA为8.12%.
3 鲫鱼肉中DHA和EPA的HPLC定量分析
3.1 样品前处理
精确称取经2.1提取的脂肪油0.5 g,加入50 mL NaOH-C2H5OH(2 mol/L)溶液,回流1 h后加入适量水,用正己烷萃取未皂化部分,重复2次,水层加入盐酸酸化后用正己烷萃取游离脂肪酸,合并正己烷层并水洗至中性、干燥、除去溶剂,用甲醇稀释到10 mL备用. 3.2 标准品溶液的制备
称取DHA标准品0.015 00 g,EPA标准品0.010 50 g,用甲醇溶解定容至
鲫鱼肉中DHA和EPA的分析
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