鲫鱼肉中DHA和EPA的分析

鲫鱼肉中DHA和EPA的分析

李铁纯,侯冬岩,回瑞华,刁全平

【摘 要】摘 要 对鲫鱼肉中DHA和EPA进行分析.采用有机溶剂提取鲫鱼肉中脂肪油，将脂肪油中的脂肪酸进行甲酯化，用气相色谱-质谱联用法鉴定鲫鱼肉中的DHA和EPA，并测定其相对百分含量.采用高效液相色谱法定量分析鲫鱼肉中DHA和EPA的含量.DHA的标准偏差为0.67%，EPA的标准偏差为0.38%.DHA的回收率为97.16%～104.20%，EPA的回收率为94.71%～101.10%.实验结果表明：气相色谱-质谱联用法测定鲫鱼肉中含DHA相对百分含量为5.33%，EPA相对百分含量为8.12%；高效液相色谱法测得鲫鱼肉含DHA18.56 μg /g，含EPA89.76 μg /g. 【期刊名称】《鞍山师范学院学报》 【年(卷),期】2019(021)004 【总页数】4

【关键词】关键词 鲫鱼肉；DHA；EPA；气相色谱-质谱联用；高效液相色谱 文章篇号 1008-2441(2019)04-0042-04

DHA和EPA主要来源于鱼类、海藻类及菌类，是人体自身不能合成的必需脂肪酸，它们具有不同的生理活性[1，2].DHA对缓解眼疲劳、恢复视力有很大作用，EPA可抑制血小板聚集，预防形成血栓，使血液黏度下降，改善血液循环，降低血压，可治疗高脂血症、动脉粥样硬化等[3-6].近年来，随着人们健康意识的增强，国内外对DHA和EPA的研究报道较多.在国外，以富含DHA和EPA的保健品很多，我国这方面起步较晚，但是发展很快.目前，关于鲫鱼肉中DHA和EPA的分析少见报道.本文采用气相色谱-质谱联用法鉴定鲫鱼肉中

DHA和EPA，并测定其相对百分含量[7-9]，采用高效液相色谱法定量分析鲫鱼肉中DHA和EPA的含量，为从鲫鱼肉中提取DHA和EPA提供分析方法.

1 仪器与药材

1.1 实验仪器

美国Hewlett Packard公司生产的6890-5973气相色谱-质谱联用仪；美国Waters公司生产的1525-2996-tcm 液相色谱仪；上海亚荣生化仪器厂生产的RE-52C型旋转蒸发器等. 1.2 实验药材

石油醚(60～90 ℃)、正己烷、甲醇、氯仿、氢氧化钾(所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水)

样品：购于鞍山水产市场，鲫鱼5尾，每尾均150 g左右. EPA和DHA标准品，纯度99.99%，美国贝斯药物技术有限公司. 1.3 样品前处理

将新鲜的鲫鱼用清水洗净后去皮取肉，将其肉剪碎.

2 GC-MS法分析鲫鱼肉中DHA和EPA

2.1 鲫鱼肉中脂肪油的提取

准确称取一定量经1.3处理过的鲫鱼肉放入锥形瓶中，分别加入适量甲醇-氯仿(2∶1.5,体积比)溶液和蒸馏水，搅拌24 h后加入适量氯仿和蒸馏水，再搅拌30 min，经过滤，取有机相得到黄色透明油状提取液.鲫鱼肉脂肪油提取率为12.0%.

2.2 甲酯化处理

取适量2.1提取的脂肪油加入适量正己烷和0.5 mol/L的KOH-CH3OH溶液，

回流20 min，冷却至室温，超声提取并离心.取上清液，待做GC-MS分析. 2.3 色谱分析

弹性石英毛细管柱：HP-5(30 m×0.25 mm×0.33 μm)；柱温：150 ℃升到200 ℃，升温速率为10 ℃/min，200 ℃升到250 ℃，升温速率为5 ℃/min，250 ℃升到280 ℃，升温速率为10 ℃/min(保持 5 min)；汽化室温度为300 ℃；分流比：50∶1. 2.4 质谱条件

电子轰击源；离子源温度220 ℃；接口温度230 ℃；扫描范围m/z：20～500.

2.5 测定方法及结果

取经2.2处理过的样品，进行GC/MS分析.鲫鱼肉脂肪酸甲酯组成的总离子流图如图1.鲫鱼肉脂肪酸甲酯组成及相对百分含量测定结果如表1.

由表1可知，鲫鱼肉中鉴定出4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸，即DHA为5.33%；5,8,11,14,17-二十碳五烯酸，即EPA为8.12%.

3 鲫鱼肉中DHA和EPA的HPLC定量分析

3.1 样品前处理

精确称取经2.1提取的脂肪油0.5 g，加入50 mL NaOH-C2H5OH(2 mol/L)溶液，回流1 h后加入适量水，用正己烷萃取未皂化部分，重复2次，水层加入盐酸酸化后用正己烷萃取游离脂肪酸，合并正己烷层并水洗至中性、干燥、除去溶剂，用甲醇稀释到10 mL备用. 3.2 标准品溶液的制备

称取DHA标准品0.015 00 g，EPA标准品0.010 50 g，用甲醇溶解定容至