CHO乙肝疫苗主要质控点1.细胞库的检定2.工艺细胞培养对培养基,表达量的要求离心层析疏水层析离子交换层析凝胶过滤层析对层析柱、填料、缓冲液的要求除菌过滤膜完整性实验甲醛处理甲醛浓度、保温时间原液检定对原液放置期限，试剂的要求半成品配置和检定对不同原液批配苗的要求分包装,贴签和包装物料平衡成品检定是否在成品贴签后检定（上市后效果和不良反应监测）收集\\分析\\评价（转瓶生产对无菌控制要求高！）National Institutes for Food and Drug ControlCHO乙肝疫苗生产工艺、质控简介-1 National Institutes for Food and Drug Control41CHO乙肝疫苗生产工艺、质控简介-2 National Institutes for Food and Drug Control二、细胞库的制备和检定检查CHO疫苗项目要求细胞库的建立三级管理原始细胞库没有更换主细胞库主细胞库工作细胞库主细胞库检定细胞外源因子检查细菌和真菌、支原体、细胞病毒外源因子检查均应为阴性细胞鉴别试验细胞染色体检查染色体应为20条目的蛋白鉴别应证明为HBsAgHBsAg表达量应不低于原始细胞库的表达量工作细胞库检定细胞外源因子检查细菌和真菌、支原体、细胞病毒外细菌和真菌支原体细胞病毒外源因子检查均应为阴性细胞鉴别试验细胞染色体检查染色体应为20条目的蛋白鉴别应证明为HBsAgHBsAg表达量应不低于原始细胞库的表达量菌种保存液氮保存National Institutes for Food and Drug Control42CHO疫苗三、疫苗原液及半成品制备和检定检查项目原液细胞制备要求培养基主要成分与批准组成一致收获物检定对照细胞病毒外源因子检查收获物合并纯化产物检定蛋白质含量应为100~200μg/ml特异蛋白带应有23 KD、27 KD蛋白带纯度（HPLC）应不低于95.0 %细菌内毒素应小于10 EU/ 10μg蛋白原液检定无菌检查无细菌、真菌检出支原体检查应符合规定蛋白质含量应为100~200μg/ml特异蛋白带应有23 KD、27 KD蛋白带纯度（HPLC）应不低于95.0 %牛血清蛋白残留量每剂应不高于50 ng DNA残留量每剂应低于10pg残留宿主杂蛋白应低于0.05%细菌内毒素应小于10 EU/ 10μg蛋白N端氨基酸序列应为------半成品无菌检查无细菌、真菌检出细菌内毒素应低于10 EU/ 剂National Institutes for Food and Drug Control包装和标签按规程要求进行四、成品生产和检定检查CHO疫苗项目要求成品鉴别试验证明为HBsAg外观应为乳白色混悬液体装量应不低于标示量pH为5.5-6.8铝含量应不高于0.43 mg/ml游离甲醛含量应不高于50 μg/ml效力测定应不低于1.0无菌试验无细菌、真菌检出异常毒性试验小鼠、豚鼠全部存活，期间无异常反应，到期体重增加细菌内毒素应小于10应小于10 EU/剂EU/剂抗生素残留量应不高于50 ng/剂National Institutes for Food and Drug Control43不同表达系统表达HBsAg的特点1.肽谱：HBsAg由约100个单体多肽组成的蛋白。酵母抗原无糖基化，CHO抗原糖基化的比例最大。2.表达方式表达方式血源—HBV从感染机体细胞中直接表达CHO—整合质粒基因转染于CHO细胞浆内。酿酒抗原—整合质粒基因转染于酵母细胞浆内。甲基营养型酵母—HBsAg基因与酵母染色体整合。甲基营养型酵母表达抗原稳定且产量较高。3.形成二硫键的数目不同National Institutes for Food and Drug Control不同种类乙肝疫苗的特点总结酵母疫苗（Merck工艺）CHO疫苗血源疫苗汉逊疫苗糖基化程度无高低无抗体反应低中高中抗体持久性差中好----细胞免疫以Th1为主晚晚早，Th1为主母婴传播阻断90tT?%National Institutes for Food and Drug Control44小结种子细胞培养过配制分装监测的质扩大程的检过程、包方法量控培养测与工的检装过的规制艺控制测及程的范、控制控制控制安全、有效、质量可控、批间一致National Institutes for Food and Drug Control谢谢National Institutes for Food and Drug Control45
病毒性疫苗new - 图文
