病毒性灭活疫苗关键点8 疫苗的添加剂防腐剂硫柳汞：常用浓度0.01% ，易溶于水。作用：对革兰氏阳性、阴性的球菌、杆菌的抑菌能力均很强。原理：重金属离子与菌体中酶蛋白的巯基（-SH）结合使酶失去活性，硫柳汞对菌体、病毒和血清蛋白的损害很弱；对人体的毒性很低。使用范围：目前我国的液体疫苗均添加硫柳汞作为防腐剂。其他防腐剂：氯仿、硝酸汞苯、石炭酸等但疫苗一般不使用。趋势：单剂不使用防腐剂，在完全达到GMP要求的100级条件下生产不应有细菌生长，只有多人份分装时不能一次用毕的疫苗才加防腐剂。National Institutes for Food and Drug Control病毒性灭活疫苗关键点10 生产设施和厂房1、生产过程和生产厂房要求控制严格；2、灭活前工序和灭活后工序须严格分开；2灭活前工序和灭活后工序须严格分开；3、活病毒洁净生产区须相对负压；4、灭活疫苗与活疫苗不得同时在同一分装车间内分装；5、操作人员须接种相应的疫苗以防感染，（新病毒疫苗生产应有相应的防护）；6、空气、污水和其他污染物须处理后排放、空气、污水和其他污染物须处理后排放；National Institutes for Food and Drug Control16毒种检定鉴别试验病毒滴度无菌检查支原体检查病毒外源因子检查免疫原性检查毒种批关键蛋白的核苷酸序列National Institutes for Food and Drug Control疫苗生产过程质量控制?细胞制备应留取一定比例的正常细胞做对照，并进行外源因子检查。?病毒接种和培养毒种与细胞按一定的比例进行接种?病毒收获液?无菌检查：结果应为阴性。?支原体检查：应无支原体生长?病毒滴定：病毒滴度应符合规定?抗原含量：应符合规定?病毒灭活验证试验：盲传三代，病毒检测应为阴性。?疫苗原液检定?无菌检查：结果应为阴性。?蛋白质含量?抗原含量?牛血清白蛋白残留量?宿主细胞蛋白残留量?（宿主细胞DNA残留量）?疫苗半成品检定National Institutes for Food and Drug Control?无菌检查：结果应为阴性。17疫苗生产过程质量控制?成品检定?鉴别试验?外观检查?装量?（水分检测）?pH?（佐剂：Al）?（防腐剂：硫柳汞、2-苯氧乙醇等）?无菌检查?异常毒性检查?效价测定?热稳定性试验?抗生素残留量检查?细菌内毒素检查National Institutes for Food and Drug Control灭活疫苗生产程序关注点1. 病毒种子属于已建毒种，是否建立三级种子批系统，疫苗生产使用工作种子批；如属于新建毒种则毒种分离、原始毒种库的建立、三级库的建立及检测是否符合要求？2. 传代细胞是否建立三级（二级）种子库系统，疫苗生产使用工作种子库细胞；3. 是否按规定的工艺，尤其是当转瓶培养而多瓶染菌是否继续转入下步工序？4. 原代细胞生产疫苗时的单一收获液如何合并？5. 传代细胞生产疫苗时是否存在细胞的横向传代？传代细胞生产疫苗时是否存在细胞的横向传代？6. 病毒滴定的取样模式，合并后取样或取小样后合并；7. 单一收获液、合并液、纯化原液、半成品、无菌试验的取样模式；检定模式，由生产人员在生产区检定或质检部检定；8. 单一收获液、合并液、纯化原液、半成品的储存期是否合理？9. 半成品配制的容器和规模与批规模是否适应？10. 半成品的添加剂是否合理? 尤其是抗生素和防腐剂；11. 分装分装一批所需时间；悬液或吸附类佐剂制品的均匀性？温度敏感制品的分装、包装过程对温度、时间的控制12. 分装过程是否全程监控?13. 成品批和亚批如何确定？14. 效力试验样品的获取形式，半成品或成品中进行？效力试验样品的获取形式半成品或成品中进行15. 以班组生产负责制且与收入挂钩，以工序过程生产；16. 灭活工序和灭活前后的材料是否存在交叉或灭活后材料倒回程序？17. 灭活验证试验是否在灭活工序结束后立即进行18. 500ml或5％的对照细胞如何处理，何时观察非血吸附现象，何时进行血吸附试验？19. 如使用生物反应器生产疫苗，如何确定对照细胞比率，如何确定“与接种病毒的细胞在相同条件下培养”的要求？National Institutes for Food and Drug Control18灭活疫苗检定程序关注点1. 细胞培养用牛血清的检定项目；2. 消化细胞用胰酶的检定项目；3. 效力试验用所取的亚批能否代表整批疫苗？4. 效力试验是半成品或成品进行；5. 效力试验检定及其标准品或参考品是否规范？（狂犬病疫苗效力试验测定时标准品、待检疫苗组的免疫次序；攻击病毒的回滴是否符合要求？狂犬病疫苗效力试验疫苗系列稀释度死亡动物不规律是否继续计算结果而不重试？）8. Vero细胞生产疫苗时，残余DNA检测的标准DNA是否适宜，是否将原始杂交膜存档；试验过程中样品抽提时DNA标准是否同样抽提？9. 异常毒性试验检查时注射过程和注射后的即时反映是否观察？10. 其它添加剂的检测，如抗生素；11. 应关注疫苗的渗透压，尤其是冻干疫苗使用冻干保护剂后的复溶渗透压的改变；12. 无菌试验的验证。National Institutes for Food and Drug Control内容1.灭活疫苗2.减毒活疫苗3.重组疫苗National Institutes for Food and Drug Control19病毒减毒活疫苗?是将分离到的病毒，应用理化因素、生物学方法（如连续通过易感性较低的动物或组织培养传代）、或其它经人工诱导的方法，促使产生定向变异，使其毒力减弱，降低了致病性，而保持良好的免疫原性和繁殖能力的病毒株称为“病毒减毒株”。?用病毒减毒株的毒种接种于细胞、组织、鸡胚等而生长繁殖后，所收获的活病毒悬液制成的疫苗，称为“病毒减毒活疫苗”。National Institutes for Food and Drug Control病毒减毒活疫苗的基本要求?接种人体后，在适当的组织系统中产生一定的或短暂的增殖，引起隐性感染或类似一次轻型的人工自然感染过程，但不会发病。?能引起与疾病相类似的免疫应答（产生相应的体液免疫和/或细胞免疫），达到预防相应疾病的目的。?免疫接种后有较持久的免疫力。?病毒不传播。?自病毒分离至疫苗生产的所有过程中，病毒不能通过传代细胞系，尤其是致瘤性的传代细胞系。National Institutes for Food and Drug Control20
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