【生物科技公司】第八章分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学

由天下分享时间：2024/8/28 17:20:29 加入收藏我要投稿点赞

4．将聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质转移至NC膜上，再与另一标记蛋白质分子(如抗体)杂交的技术。

5．不经电泳分离直接将样品点在NC膜上用于杂交的技术。

6．指采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断。由于常用硅芯片作为支持物，且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术，故称基因芯片技术。

7．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大上百万倍。

8．指从对一种致病基因的功能的了解出发克隆该致病基因的策略。血友病的第Ⅷ因子基因是以此策略克隆成功的。

9．指将目的基因整合人受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导人动物子宫，使之发育成个体，该个体能把目的基因继续传给子代，该技术称转基因技术。目的基因的受体动物就是转基因动物。

二、填空题

16．DNARNA蛋白质17．引物TaqDNA聚合酶dNTP含Mg2—’的缓冲液1S．变性退火延伸1Q．模板一引物杂交引物延长与合成阻断电泳放射自显影直读图20．遗传图分析物理图分析转录图分析序列图分析资料的储存和利用21．功能基因组学蛋白质组学22．功能性克隆定位克隆候选基因克隆23．功能性克隆定位克隆

三、选择题

A型题 1—10 11—20 21—30 31—40 41—50 5—60

B型题 1—10 11—20 21—30 31—40

X型题 1—10 11—20 21—30 31—40 四、问答题

1．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大百万倍。其基本工作原理是：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5，末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留复制的机制沿模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，使目的DNA片段得到大量扩增。其反应体系包括：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶、dNTP以及含Mg2+的缓冲液。PCR反应步骤为(1)变性：95℃，15s；(2)退火：Tm-5C，一般为55℃，30s；(3)延伸：72CL5rain。此三步为一个循环，一般进行25～30次循环。最后一次循环的延伸反应时间应适当延长(5min)，以获得较大量的DNA产物。

2．双脱氧末端终止法测序由Sanger创立，是常用方法之一。其基本原理是利用DNA聚合酶的聚合反应，在试管内复制待测DNA的随机长度的互补链。反应设A、T、C、G体系，其中分别加入适当比例的相应ddNTP，由于ddNTP缺少3，一OH，不能形成磷酸二酯键，而使合成反应终止，致使4管中所合成的产物为随机长度的终止于相应ddNTP的DNA片段。从总体看，4管中所有产物是一系列长度只差1个核苷酸的聚合链，经超薄高压电泳可将其一一分辨。大体过程为：(1)单链模板的制备；可据M13噬菌体的特性，将目的基因用基因工程的方法插入M13复制型双链DNA中，培养扩增后，提取单链M13噬菌体作模板(2)模板一引物杂交：引物与待测DNA的3‘端上游杂交。并沿5，一3，方向延长，所合成新链即待测DNA的互补链。(3)引物的延长与合成阻断：杂交液分4管，各管分别加入Klenow大片段、4种dNTP(其中一种被标记)、一种ddNTP和缓冲液，保温使引物延长并随机阻断。(4)电泳：四泳道超薄聚丙烯酰胺一尿素凝胶高压电泳。(5)放射自显影和读图：将凝胶板干燥后，与X线片夹在一起，使X线片在电泳带相应位置曝光、显影、定影后直读图像。自终端至始点读出新合成链的5’一3’序列，其互补链即为待测DNA的碱基序列。

3．(1)以酪氨酸酶RNA为模板合成的’’P标记的cDNA为探针，对克隆片段进行Southern杂交。

(2)克隆片段与酪氨酸酶mRNA杂交，mRNA翻译活性丧失，该克隆片段为酪氨酸酶的基因。

基因组学与医学

测试题

一、名词解释 1．人类基因组计划 2.结构基因组学 3．功能基因组学 4．比较基因组学 5．基因病二、填空题

1．Southernblotting用于研究一一——，、Northernblotting用于研究一一——，Westernblotting用于研究一一——。

2．PCR的基本反应步骤包括一——、——和——三步。

3.在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入——、————、——和——。

4．Sange法测序的基本步骤包括——、——、——和——。

5．人类基因组计划的主要研究内容包括、、、、。 6．目前克隆致病相关基因的主要策略有——、——、——。

7．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是————，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是————。

三、选择题 A型题