柠檬果皮精油的抑菌实验
食品保鲜主要手段多为冷藏结合化学杀菌剂。但是化学杀菌剂对人类健康和
环境的危害同样也成为全世界关心的重要问题。因此，开发天然的防腐保鲜剂已经成为 当前食品行业保鲜研究领域的一个热点。从某些植物中提取的精油具有良好的抑菌能力 和较高的食用安全性，是开发天然防腐保鲜剂的重要原材料。
精油除了具有良好的抑菌能力外，在气态时还具有较强的生物活性，可以作为使用 方便的熏蒸剂用于农产品的贮藏保鲜过程之中。一些研究表明，植物精油可以通过控制 细菌生长腐败而延长食品的存储货架期。
通过对柠檬果皮抑菌性的探讨，确定出离心法与蒸馏法所得柠檬精油的抑菌性能
力，进一步比较离心法柠檬精油与蒸馏法所得柠檬精油的区别，为后续将柠檬精油作为 抑菌剂而使用提供一定的理论依据。
1材料与方法
1.1材料与试剂
柠檬精油 蒸馏水 牛肉膏 蛋白胨NaCl 琼脂 试验菌种
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌
1.2仪器与设备
电子天平 酸度计 电热恒温隔水式培养箱 立式压力蒸汽压灭菌器 家用冷藏冷冻箱 显微镜 血球计算板 磁力加热搅拌器 电炉 其他：具塞三角瓶、试管、大小烧杯、量筒、培养平皿、涂布棒、接种环、移液管、 酒精灯、游标卡尺等。
1.3实验方法 菌悬液的制备
细菌选用牛肉膏蛋白胨作为培养基，将供试菌种分别接种于装有对应培养基的试管
之内，进行扩大培养。将细菌置于 37℃恒温培养箱中培养 24h，然后取活化好的菌种斜 面，用无菌生理盐水配制成（1~10）×10个/ml 的菌悬液，备用。
1.4抑菌效力的测定
采用滤纸片扩散法测定细菌的抑菌效力。 分别取 0.1 ml 的菌悬液再分别倒入培养皿 中。用无菌三角玻璃棒将菌悬液在平板表面涂抹均匀， 直至涂布棒与培养基之间有粘稠 感。将直径约 6mm 的无菌滤纸片先在柠檬精油中充分浸润，然后取出置于平板中，并 用无滤纸片的含菌培养皿作为对照， 最后将上述平板置于恒温培养箱中， 37℃培养 24h。 用游标卡尺测定其抑菌圈直径，取其平均值。
最低抑菌浓度（MIC）的测定
根据抑菌圈测定的结果，采用试管法
测定各样品的最低抑菌浓度 MIC，以丙酮作
为溶剂，用无菌试管配制一系列梯度浓度的柠檬精油溶液，将各梯度浓度的精油溶液加
入已经融化好的培养基中，混合均匀，使得培养基中精油含有的浓度分别为 8.000%、 4.000%、2.000%、1.000%、0.500%、0.250%、0.125%。等到培养基冷却凝固后，取受 试菌种进行平板划线接种菌种， 在 37℃培养 24h 后观察结果，每个精油浓度梯度分别作 3 组平行试验，与对照组（菌落正常生长）进行比较，有肉眼可见菌落的生长者视为无 抑制作用，以完全没有菌落生长的最低精油浓度为其最低抑菌浓度（目测并以下列标准 记录：菌完全无生长“-”；菌生长迟缓“+”；菌生长比较快“++”；菌生长迅速“+++” ）、
判断抑菌效果标准
抗菌素抑菌圈试验结果的判定标准：抑菌圈直径大于 20mm 时为极敏感，大于 15~20 mm 时为高度敏感，圈者为不敏感
～15 mm 时为中度敏感，7～9 mm 时为低度敏感，小于 7mm 无抑菌 10
柠檬香精抑菌实验方案
