利用GeneXpert 法检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基
因及耐药性分析*
宋林键,叶丽艳,赵 强,沈跃云,罗燕萍△
【摘 要】摘 要:目的 利用 GeneXpert Carba-R?全自动病原体快速检测系统检测碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药基因，了解该院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)耐药情况和耐药基因分布，为了解临床CRE感染趋势提供依据。方法 采用回顾性调查方法，收集2016年3月至2017年10月分离自非呼吸道标本的141株耐碳青霉烯类肠杆菌科菌株。结果 肺炎克雷伯杆菌114株，大肠埃希菌13株，阴沟肠杆菌8株，产气肠杆菌2株，弗氏枸橼酸杆菌3株，魏氏柠檬酸杆菌1株。blaKPC 103株，blaNDM 22株，blaOXA-48 5株，含两种及两种以上耐药基因12株。结论 GeneXpert Carba-R?全自动病原体快速检测系统能快速检测出耐碳青霉烯类肠杆菌的耐药基因，耐碳青霉烯类抗菌药物的细菌对多种抗菌药物同时耐药，检出的耐药基因型为KPC、NDM、OXA-48及IMP。含不同耐药基因的肠杆菌科细菌其耐药情况不同。 【期刊名称】《国际检验医学杂志》 【年(卷),期】2019(040)024 【总页数】4
【关键词】关键词:GeneXpert; 耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌; 耐药基因 论著·临床研究
中图法分类号：R446.5
基金项目：国家重点研发计划项目(2017YFC1601405)。
本文引用格式：宋林键,叶丽艳,赵强,等.利用 GeneXpert 法检测耐碳青霉烯类
肠杆菌科细菌耐药基因及耐药性分析[J].国际检验医学杂志，2019,40(24):2999-3002.
随着抗菌药物在临床治疗中的广泛应用，在抗菌药物的选择压力下，细菌的耐药能力逐渐增强，多药耐药菌的检出率也逐年上升[1]。其中，耐碳青霉烯类抗菌药物细菌的出现和传播，引起了广泛的关注。作为抗菌谱最广，抗菌活性最强的第三线临床抗感染药物，碳青霉烯类抗菌药物常用于治疗产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶的肠杆菌科细菌所引起的感染。但近年来，耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌(CRE)已经出现并呈上升趋势，其中以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌最为严重，这给相关细菌感染的控制和治疗带来了诸多困难。因此，快速准确地了解鉴定耐药基因的类型，对临床治疗及预防耐药菌的传播具有重要的意义。
GeneXpert Carba-R?系统由美国Cepheid研发、生产的核酸提取扩增检测一体化系统，可在体外快速定性或定量检测感染性疾病病原、耐药性基因及肿瘤基因等，结果高度准确，可及时为临床决策提供诊疗依据[2]。已有研究结果表明赛沛 GeneXpert Carba-R?全自动病原体快速检测系统能快速准确的检测出耐碳青霉烯酶基因[3-5]。为快速鉴定耐碳青霉烯类抗菌药物及其携带的耐药基因，也为指导临床医生合理用药提供早期依据，现将本院2016年3月至2017年 10月利用GeneXpert Carba-R?全自动病原体快速检测系统检出的非呼吸道标本中的CRE菌株的分布和耐药基因特点分析结果如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 收集 2016年3 月至 2017年10月本院临床患者的非呼吸道标本(尿液、引流液、静脉血、胆汁等)中分离出的亚胺培南耐药的肠杆菌科菌株。
同一患者，同一部位的标本只收集1株。细菌分离鉴定按《全国临床检验操作规程》要求执行。质控菌株为大肠埃希菌 ATCC25922。
1.2 仪器与试剂 全自动快速微生物质谱检测系统VITEK MS和VITEK 2 Compact型全自自动微生物鉴定药敏仪(法国生物梅里埃公司)，GeneXpert Carba-R?全自动病原体快速检测系统(美国赛沛公司)。
1.2.1 菌株鉴定和药敏试验 收集141株菌株，利用全自动快速微生物质谱检测系统VITEK MS进行细菌鉴定。同时采用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定和药敏分析系统对分离菌株进行药敏试验，检测其对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢他啶、亚胺培南、庆大霉素、复方磺胺甲噁唑的耐药情况。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。
1.2.2 细菌耐药相关基因检测 用含有Xpert Carba-R的试剂盒将菌株在Cepheid GeneXpert Ⅳ系统上进行分析[4]。采用中国蓝平板培养141株CRE细菌，挑取单个菌落，使用生理盐水分别配置成0.5麦氏浓度的菌悬液，将10 μL菌悬液加入GeneXpert Carba-R?样本试剂中混匀，将混匀后的液体15 mL加入到试剂盒中，扫码上机，采用全自动病原体快速检测系统，48 min后读取结果。
1.3 统计学处理 采用世界卫生组织(WHO)推荐的WHONET5.6软件对菌株分布及药敏结果进行统计分析。SPSS17.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 CRE分布情况
2.1.1 标本来源分布 141株CRE主要来源为尿液37株(26.2%)，引流液32株
利用GeneXpert法检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及耐药性分析
