2019-2020年高二生物同步精品课堂（提升版）（选修1）（讲） Word版含解析
一、基础知识 （一）培养基 【知识点讲解】
1.概念：讲解培养基概念：由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质。 2.种类 标准 培养基类型 固体培养基 物理性质 半固体培养基 液体培养基 3.成分 （1）基本成分 培养基成分 牛肉膏5g 蛋白胨10g NaCl 5g H2O定容至1000ml （2）特殊成分和条件 培养基还需要满足不同微生物生长对PH、氧气、特殊营养物质的要求：如乳酸杆菌时需要添加维生素 ，霉菌需要将培养基pH调节为酸性 ，细菌时需要将pH调节为中性或微碱性 。 【方法点拨】培养基的配制原则
(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
(3)pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。 【典型例题】
下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是（ ） 成分 含量 NaN03 3g K2HP04 1g KC1 0.5g MgS04·7H20 0.5g FeS04 0.01g （CH20) 30g H20 1L 青霉素 0.1万单位 提供的主要营养物质 碳源、磷酸盐和维生素 氮源和维生素 无机盐 氢元素、氮元素 配制特点 加入琼脂较多 加入琼脂较少 不加入琼脂 主要应用 菌种分离、鉴定、计数 菌种保存 工业生产、连续培养 A. 依物理性质划分，该培养基属于液体培养基 B. 依用途划分，该培养基属于选择培养基
C. 培养基中的唯一碳源是（CH20)，唯一氮源是NaN03
D. 若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去（CH20),再添加纤维素 【答案】D
【解析】分析表格信息可知，因配方中没有凝固剂琼脂，所以依物理性质划分，该培养基属于液体培养基，A项正确；因配方中有青霉素，所以依用途划分，该培养基属于选择培养基，B项正确；培养基中的唯一碳源是（CH20)，唯一氮源是NaN03，C项正确；若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去（CH20)和青霉素，再添加纤维素，D项错误。 【变式训练】
下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是( )
成分 含量 蛋白胨 10 g 葡萄糖 10 g K2HPO4 2 g 伊红 美蓝 蒸馏水 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基 B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨 C.该培养基缺少提供生长因子的物质 D.该培养基调节合适的pH后就可以接种使用 【答案】B
（二）无菌技术 【知识点讲解】 1.主要方面
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品相接触。 2.消毒与灭菌的比较
项目 理化因素强度 消灭微生物数量 是否消灭芽孢和孢子 消毒 温和 灭菌 强烈 部分 全部 否 是 3.常用的消毒与灭菌的方法 （1）消毒方法：
①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；
②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；
③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。
④实验操作者的双手使用酒精进行消毒； ⑤饮水水源用氯气进行消毒。 （2）灭菌方法：
①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱 ； ③培养基、无菌水等使用 高压蒸汽灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。 ④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。 【典型例题】
关于消毒和灭菌的不正确理解是（ ）
A. 灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、包括芽孢和孢子 B. 消毒和灭菌实质上是相同的
C. 常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
D. 常用消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线法、化学药物法 【答案】B
【变式训练】
微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是( )
①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢
②接种操作要在酒精灯火焰附近进行
③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒 ④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 ⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌
⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌 A.①③ B.②④ C.③⑤ D.④⑥ 【答案】D
二、实验操作
（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基
1.计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。
2.称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 3.溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 4.调pH：用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。
5.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。
6.倒平板：待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 【方法点拨】倒平板的方法及注意事项
①火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞； ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；
③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 （二）纯化大肠杆菌 1.平板划线法 （1）定义和目的
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面。在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。 （2）操作步骤
①将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。 ④将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3～5条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。 ⑧将平板倒置放在培养箱中培养。 2.稀释涂布平板法 （1）定义和目的
将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 （2）操作步骤 系列稀释操作
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