骨组织石蜡切片制作
步骤：
1.固定：切取骨缺损出的骨组织，用PBS冲洗，放入4%多聚甲醛缓冲液内固定12—24h。
2.脱钙：将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙24h.
3.脱水：将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗3次，再用50%的酒精冲洗2 次，常规脱水，70%酒精（60min），80%酒精（40min）,95%酒精（30min）,100%酒精1（25min）,100%酒精II（25min）。 4.透明：二甲苯I(35min)，二甲苯II（35min）。
5.包埋：将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡I 1小时，石蜡II 1小时。
6.切片：包埋后的组织块经修理后，用切片机切成4um的石蜡带，将组织石蜡块在50℃温水中展片，然后用干净的载玻片捞片。 7.烤片：将切好的组织片放入63℃恒温箱中烤片2小时。 免疫组化检测 步骤：
1.脱蜡：将组织切片放入62℃恒温箱中烘烤20min 二甲苯1（10min） 二甲苯2（10min）。
2.水化：100%酒精1（2min） 100%酒精（2min） 95%酒精（2min） 80%酒精（2min） 70%酒精(2min) 。 3.PBS冲洗3次，每次5min.。
4.抗原修复：将组织片置0.01M的柠檬酸缓冲液（PH6.0）中煮沸
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15min ,自然冷却至室温。 5.PBS冲洗3次，每次5min。
6.阻断：3%去离子水37℃孵育10min,以灭活内源性过氧化物酶活性。
7.PBS冲洗3次，每次5min。
8.滴加1抗（GFP 1：100稀释, 4℃过夜） 9.PBS冲洗3次，每次5min。
10.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂1，37℃孵育,20min, PBS
冲洗3次，每次5min。
11. 滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂2，37℃孵育,20min, PBS
冲洗3次，每次5min。 12.DAB显色5min。 13.自来水冲洗10min。
14.苏木精复染2min,盐酸酒精分化。 15.自来水冲洗10min。
16.常规脱水，透明，封片，镜检。
组织切片HE染色
步骤
1、将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯1，二甲苯II进行脱蜡各10min。
2、脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇I、无水乙醇II、95%酒精、80%酒精、70%酒精中各2 min，PBS冲洗2次，每次5min。
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3、苏木素染色3 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸酒精分色2 s，自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %的酒精中各2 min,伊红浸泡5 s，自来水冲洗3min。
4、 再将组织切片依次侵入95 %酒精、无水乙醇I、无水乙醇II中各3min，最后再依次侵入二甲苯I,二甲苯II各5min。 5.中性树胶封片，镜检。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）
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免疫组化、HE染色步骤
