实验一蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定
一、实验目的与要求
1.掌握蛋白质的两性解离性质；
2.熟练掌握测定蛋白质等电点的基本方法。 二、实验原理
蛋白质是由氨基酸组成的高分子化合物。虽然大多数的α-氨基和α-羧基成肽键结合，但仍有N末端的氨基和C末端的羧基存在，同时侧链上还有一些可解离基团。因此，蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节蛋白质溶液的pH，可使蛋白质带上正电荷或负电荷；在某一pH时，其分子中所带的正电荷和负电荷相等，此时溶液中蛋白质以兼性离子形式存在。
在外加电场中蛋白质分子既不向正极移动也不向负极移动，此时溶液的pH称为该蛋白质的等电点，蛋白质的溶解度最小。不同的蛋白质，因氨基酸的组成不同有不同的等电点。
三、实验材料、试剂与仪器 1.材料与试剂
NaOH、HCl、乙酸、溴甲酚绿、酪蛋白、精密pH试纸等。 0.5 %酪蛋白溶液：
0.5 g酪蛋白，先加入几滴1 mol/L的NaOH使其湿润，用玻璃棒搅拌研磨使成浆糊状，逐滴加入
0.01 mol/L的NaOH使其完全溶解后定容到100 mL.酪蛋白—乙酸钠溶液：将0.25 g酪蛋白加5 mL 1 mol/L的NaOH溶解，加20 mL水温热使其完全溶解后，再加入5 mL 1 mol/L的乙酸，混合后转入50 mL的容量瓶内，加水到刻度，混匀备用（pH应为8~
8.5）；
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0.01%的溴甲酚绿溶液：将0.01g溴甲酚绿溶解于100mL含有 0.57mL
0.1mol/LNaOH的水中。该指示剂的变色范围是： 酸性（pH 3.8）为黄色，pH 5.4为蓝色；
0.02 mol/L的HCl溶液：将0.8 mL浓盐酸用蒸馏水稀释到480 mL即可； 0.02 mol/L的NaOH溶液：将0.8 g NaOH溶解于100 mL水中，最终加入到1000 mL；
0.1 mol/L的乙酸溶液：
将1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL；
0.01 mol/L的乙酸溶液：将0.1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL； 1 mol/L的乙酸溶液：1 mL冰醋酸（17 mol/L）加水到17 mL即可。 2.仪器
试管、滴管、移液管、pH试纸等。 四、实验方法与步骤 1.蛋白质的两性反应
1）取一支干净的试管，加入20滴 0.5 %的酪蛋白溶液，逐滴加入
0.01 %的溴甲酚绿溶液（约5~7滴），充分混合，观察溶液的颜色并解释（蓝色）。
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2）逐滴加入
0.02 mol/L的HCl，随加随摇动试管，直到出现明显的沉淀为止，用精密pH试纸测溶液的pH，观察溶液的颜色变化。
3）继续加入
0.02 mol/L的HCl，观察沉淀的变化和溶液颜色的变化。 4）逐滴加入
0.02 mol/L的NaOH到上面的溶液中，使溶液的pH接近中性，观察沉淀是否形成。
5）继续滴加
0.02 mol/L的NaOH，观察沉淀的变化。 2.酪蛋白等电点的测定 1）取9只试管分别编号1~ 9.
2）按下表向每管中加入试剂。注意，每种试剂加完后，要振荡试管。 3）试剂全部加完后，静置20 min。
4）观察每管内溶液的混浊度，用“+”、“-”表示沉淀的多少。 5）判断酪蛋白的pI是多少？ 试管号9水/mL 2.4 3.2— 2.0 3.0
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3.5 1.5 2.75 3.381 mol/L HAc/mL 1.6
0.8———————0.1mol/L HAc/mL—— 4.0 2.0 1.0
0.5———0.01 mol/L酪蛋白醋酸HAc/mL—————— 2.5 1.25
0.62钠溶液/mL 1溶液最终的 pH 3.5 3.8 4.1
4 / 5
4.4 4.7 5.0 5.3 5.6
5.9沉淀多少 五、思考题
1.何谓蛋白质的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度最低，为什么？2.本实验中，根据蛋白质的何种性质测定其等电点？ 3.测定蛋白质等电点为什么应在缓冲液中进行？
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实验一 蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定
